干細(xì)胞研究是再生醫(yī)學(xué)的核心方向,如何通過(guò)生物材料的智能化設(shè)計(jì)實(shí)現(xiàn)干細(xì)胞行為的主動(dòng)控制關(guān)系到干細(xì)胞和生物材料的未來(lái)發(fā)展。絲蛋白可被制成多種材料形式,具有可調(diào)的機(jī)械性能與可載藥性,是研究干細(xì)胞分化、增殖和干性維持等細(xì)胞行為的理想備選材料。然而,絲蛋白多變的內(nèi)在結(jié)構(gòu)和不明確的組裝機(jī)制極大限制了絲蛋白材料的制備和生物功能設(shè)計(jì);也增加了以絲蛋白為基質(zhì)整合多種影響因素,進(jìn)行干細(xì)胞微環(huán)境體外構(gòu)筑調(diào)控細(xì)胞行為的技術(shù)難度。為解決上述問(wèn)題,本論文以課題組制備的絲蛋白納米纖維為基礎(chǔ),通過(guò)物理和化學(xué)法調(diào)控其結(jié)構(gòu),深入研究絲蛋白結(jié)構(gòu)和性能關(guān)系,設(shè)計(jì)具有特定結(jié)構(gòu)和功能的絲蛋白材料,研究其對(duì)干細(xì)胞干性的調(diào)控行為。首先系統(tǒng)研究絲蛋白的結(jié)構(gòu)變化對(duì)化學(xué)調(diào)控的影響規(guī)律,提出有效提高絲蛋白化學(xué)修飾性能的可行策略,加深對(duì)絲蛋白內(nèi)在結(jié)構(gòu)變化機(jī)制的理解。隨后通過(guò)電場(chǎng)調(diào)控的方法制備絲蛋白凝膠,實(shí)現(xiàn)對(duì)囊胚腔內(nèi)細(xì)胞團(tuán)生長(zhǎng)特定微環(huán)境的模擬,在不添加白血病抑制因子的情況下,實(shí)現(xiàn)胚胎干細(xì)胞干性的體外長(zhǎng)效維持,并分析研究絲蛋白凝膠實(shí)現(xiàn)干細(xì)胞體外干性維持的內(nèi)在機(jī)制。最后基于絲蛋白納米纖維水凝膠材料對(duì)胚胎干細(xì)胞的干性維持效果,繼續(xù)調(diào)節(jié)水凝膠的結(jié)構(gòu),... 

【文章來(lái)源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１絲蛋白在分子運(yùn)動(dòng)、電荷量、親水作用和濃度調(diào)控下的自組裝過(guò)程［１２］

?ＯＨ?，０５０?Ｈ??時(shí)｝?７?０１％?？?〇?Ａ?．?０?；＇?＾?Ｍ?ｆ?ｒ??＼?１２?￣２％￣?：：?■?＇■?？．?．?、??Ｍｅｔ?（Ｍ）丨?４?Ｑ１％?＇?，０?Ｊ?°??．ＰｈｅｊｒＬ：ｊ—ｊ熱―！?二?１??Ｐｒｏ?（Ｐ）?￣?ｊ?１４?；?０?３＾?Ｉ?＂?ｆ／；＂?－，雜，ｗｔ；ｗｖ??細(xì)購(gòu)：Ｔ?—．?“?°?．．?■??寐?ｉ，＇．？．煙」?２７７?Ｔｙｒ??ｊ?Ｖａｔ?（Ｖ）?ｊ?９７?Ｉ?１８％?ｊ??圖１－２絲蛋白中氨基酸組分及活性氨基酸化學(xué)修飾方法［２９］。??Ｆｉｇ．?１－２?Ａｍｉｎｏ?ａｃｉｄ?ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ?ｏｆ?ｓｉｌｋ?ｆｉｂｒｏｉｎ?ａｎｄ?ｃｈｅｍｉｃａｌ?ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｒｅａｃｔｉｖｅ??ａｍｉｎｏ?ａｃｉｄｓ．??１．２．３生物法??在自然界進(jìn)化過(guò)程中，生物體制備出不同特殊結(jié)構(gòu)的絲蛋白材料以滿足不同的功??能，然而除了人工培育的家蠶和柞蠶外，其它昆蟲(chóng)分泌的特殊絲蛋白產(chǎn)量極低，限制??了相關(guān)的研究和應(yīng)用。為解決上述問(wèn)題，研宂者們建立和開(kāi)發(fā)了不同生物合成方法，??期望實(shí)現(xiàn)絲蛋白材料的火量制備以及初級(jí)序列和鏈長(zhǎng)的精細(xì)調(diào)控，以提高材料的質(zhì)量，??保障材料的安全性［３６１。??目前，絲蛋白的生物設(shè)計(jì)主要以大腸桿菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ?ｃｏｌｉ，簡(jiǎn)稱Ｅ．?ｃｏｌｉ）為宿主，??通過(guò)天然ＤＮＡ序列測(cè)定和重組ＤＮＡ設(shè)計(jì)兩大步驟，根據(jù)不同序列要求，經(jīng)過(guò)天然??４??

ｉｔｉｖｅ?ｄｏｍａｉｎ?ｃ?ｍ?■?ｐｌａｓｍｉｄ?＾??ｕｓｅｄ?ａｓ?ｔｅｍｐｌａｔｅ?Ｈ?ｊ?ｊ??＿?１！??ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ?ｆｃ．?＾??Ｃ－ｍｏｄｕｌｅ?■?＾?ｏ??ｎ?Ｉ??Ｉ?Ｉ??ｘ?ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ?＾?＾??ｉｎ?ｈｏｓｔ?＾??ｃｏｌｔ??ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）?卜卜卜｜ｍ?｜－卜卜卜■？卜置??＾＾＾ＢｍＡＳＧＰＧＧＶＧＰＥＮＱＧＰＳＧＰＧＧＹＧＰＧＧＰ?１?ｉｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ?ｐｒｏｔｅｉｎ??圖１－３以圓蛛絲蛋白（Ａｒａｎｅｕｓ?ｄｉａｄｅｍａｔｕｓ?ｆｉｂｒｏｉｎ?４，簡(jiǎn)稱ＡＤＦ４）的重復(fù)單元??為模板制備重組絲蛋白：氨基酸模板經(jīng)擴(kuò)增、逆轉(zhuǎn)錄、密碼子優(yōu)化得到重組基因并??轉(zhuǎn)移至質(zhì)粒中，以大腸桿菌為宿主表達(dá)重組基因得到重組絲蛋白１＾。??Ｆｉｇ，?１－３?Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｓｉｌｋ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｕｓｉｎｇ?ｔｈｅ?ｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅ?ｃｏｒｅ?ｏｆ?Ａｒａｎｅｕｓ?ｄｉａｄｅｍａｔｕｓ??ｆｉｂｒｏｉｎ?４?（ＡＤＦ４）?ａｓ?ａ?ｔｅｍｐｌａｔｅ：?ｔｈｅ?ｔｅｍｐｌａｔｅ?ｗａｓ?ｒｅｐｅａｔｅｄ?１６?ｔｉｍｅｓ，?ｂａｃｋ?ｔｒａｎｓｌａｔｅｄ?ａｎｄ??ｃｏｄｏｎ?ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ?ｔｏ?ｇｅｎｅｒａｔｅ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｇｅｎｅ?ａｎｄ?ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ?ｉｎｔｏ?ａ?ｐｌａｓｍｉｄ．?Ｔｈｅ?ｈｏｓｔ?Ｅ．??ｃｏｉｌ?ｗａｓ?ｔｈｅｎ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ?ｂｙ?ｔｈｅ?ｐｌａｓｍｉｄ?ａｎｄ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ?ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ．??５??


本文編號(hào)：3429935