脂肪酶能將甘油三酯水解為甘油和游離脂肪酸,同時(shí)也能催化酯化反應(yīng)和酯交換反應(yīng),廣泛應(yīng)用于洗滌劑和食品行業(yè),化工合成以及醫(yī)藥領(lǐng)域。來源于枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）168的脂肪酶（Lipase A,LipA）相較于其他脂肪酶具有如下特點(diǎn):分子量小,缺少蓋子結(jié)構(gòu),無界面活化現(xiàn)象,對C8底物有偏好性,并具有良好的堿耐受性。LipA以其顯著的特性被深入研究,已報(bào)道多種不同特性的突變體,但目前的分泌表達(dá)量較低。本論文旨在使用組合策略提高LipA在缺失六個(gè)胞外蛋白酶的枯草芽孢桿菌WB600中的分泌表達(dá)量,以便于LipA后續(xù)的研究。為了實(shí)現(xiàn)LipA的有效分泌表達(dá),我們比較了不同信號肽的分泌效率以及不同啟動子和雙啟動子的啟動強(qiáng)度。在LB培養(yǎng)基中37 ^oC培養(yǎng)12小時(shí)后,含有信號肽SP_lipA和雙啟動子P₄₃-P_hag的重組菌株B.subtilis L25擁有最高的分泌表達(dá)量,胞外脂肪酶的酶活為64.9 U/m L。通過對發(fā)酵溫度和時(shí)間以及不同商業(yè)培養(yǎng)基的探索,本研究確定最適于重組菌株B.subt... 

【文章來源】：華南理工大學(xué)廣東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

同源重組技術(shù)路線圖

華南理工大學(xué)碩士學(xué)位論文342.4結(jié)果與分析2.4.1pMAL0載體構(gòu)建圖2-3LipAPCR擴(kuò)增片段Fig.2-3PCRamplifiedfragmentsLipA和pMA5qPCR結(jié)果見圖2-3，與理論片段大小相符，重組后的轉(zhuǎn)化子菌落PCR結(jié)果見圖2-4，挑取2#菌株送上海生工測序，測序結(jié)果正確。圖2-4菌落PCRFig.2-4ColonyPCR1：LipAPCR片段；2和3分別為pMA5qPCR擴(kuò)增片段M1：DL2000DNAMarker；M2：DL15000DNAMarker1M123M2750bp500bp5000bp2500bp2000bpM123456781000bp500bp250bp1-8：pMAL0轉(zhuǎn)化子菌落PCR結(jié)果，M：DL2000DNAMarker

第二章信號肽對脂肪酶A分泌效率的影響352.4.2pMAL1-10載體構(gòu)建圖2-5B.subtilis168基因組電泳圖Fig.2-5ElectrophoresisofB.subtilis168genome圖2-6PCR擴(kuò)增片段Fig.2-6ElectrophoresisofamplifiedfragmentsM11：B.subtilis168基因組電泳圖，M：15000DNAMarker15000bp1、2分別為載體pMAL0PCR擴(kuò)增片段，3-12分別為信號肽SPamyE，SPaprE，SPbpr，SPepr，SPmpr,SPnprB，SPnprE，SPphoB，SPyhfM，SPywmCPCR擴(kuò)增片段，M1：5000DNAMarker，M2：2000DNAMarkerM11234567M289101112250bp100bp5000bp3000bp


本文編號：3377000