胞嘧啶核苷,又名胞苷,是多種抗癌藥物和保健食品的重要原料。胞苷主要通過微生物發(fā)酵方法獲得,但現(xiàn)有菌株的胞苷發(fā)酵水平不高,受到多種因素影響。為獲得胞苷高產(chǎn)菌株,從全局代謝網(wǎng)絡(luò)角度設(shè)計(jì)并優(yōu)化胞苷代謝合成途徑是有效提高胞苷合成能力的策略之一。本文主要針對(duì)胞苷降解途徑、前體物PRPP代謝支路和乙酸代謝支路,提出了 3種有利于胞苷高效生物合成的策略,采用常壓室溫等離子體（Atmospheric and Room Temperature Plasma,ARTP）誘變技術(shù)和CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)改造胞苷代謝網(wǎng)絡(luò),構(gòu)建高產(chǎn)菌株。主要研究內(nèi)容如下:1、應(yīng)用ARTP技術(shù)選育組氨酸營養(yǎng)缺陷型的產(chǎn)胞苷大腸桿菌突變株。ARTP誘變篩選技術(shù),具有設(shè)備更精良,操作方法更簡易,安全系數(shù)更高,突變頻率高等優(yōu)點(diǎn)。為了篩選高產(chǎn)胞苷菌株,通過ARTP技術(shù)誘變篩選組氨酸營養(yǎng)缺陷型突變菌,以阻斷PRPP向組氨酸的代謝支路,從而提高胞苷的合成量。以大腸桿菌K-12（△thrA）為作出發(fā)菌株,使用ARTP誘變技術(shù),在放電功率110 W,氣流量10 SLPM,誘變時(shí)間為70 s的條件下,篩選得到組氨酸營養(yǎng)缺陷型突變菌E.c... 

【文章來源】：寧夏大學(xué)寧夏回族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－５技術(shù)路線??Ｆｉｇｕｒｅ?１－５?Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ?Ｒｏｕｔｅ??

寧夏大學(xué)碩士學(xué)位論文?第二章應(yīng)用常壓室溫等離子體誘變技術(shù)選育組氨酸營養(yǎng)缺陷型突變株??圖２－５疑似Ｈｉｓ－菌株的初篩結(jié)果??Ｆｉｇｕｒｅ?２－５?Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ?ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｓｕｓｐｅｃｔｅｄ?Ｈｉｓ－?ｓｔｒａｉｎｓ??２．３．２．３?Ｈｉｓ－突變菌株的復(fù)篩??選用平板劃線對(duì)照法對(duì)２株Ｈｉｓ？疑似菌株進(jìn)行復(fù)篩，每株菌兩個(gè)平行，第１株編號(hào)①和??②，第２株編號(hào)③和④。從圖２－５可看出，第２株菌在ＭＭ上不生長，在Ｈｉｓ上生長情況良??好，可確定該菌為Ｈｉｓ？菌株。??ＷＴＷ?＇??圖２－５疑似Ｈｉｓ－菌株的復(fù)篩結(jié)果??Ｆｉｇｕｒｅ?２－５?Ｒｅｓｃｒｅｅｎｉｎｇ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｓｕｓｐｅｃｔｅｄ?Ｈｉｓ－?ｓｔｒａｉｎｓ??２＿３．３?Ｈｉｓ－菌株傳代穩(wěn)定性分析??將復(fù)篩得到的Ｈｉｓ？菌株在Ｈｉｓ斜面培養(yǎng)基上傳代培養(yǎng)２０次后，采用平板劃線對(duì)照法鑒??定Ｈｉｓ？突變株的穩(wěn)定性，如圖２－６可知，該菌株依然在ＭＭ上不生長，在Ｈｉｓ上生長，發(fā)現(xiàn)??這個(gè)Ｈｉｓ？菌株仍然具有組氨酸缺陷型這個(gè)性狀，說明該突變株可以穩(wěn)定遺傳，具有良好的遺??傳穩(wěn)定性，并將該菌株編號(hào)為五．＾〇／／１＾－１２（么／／７／＾出５－）？??－１７－??

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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3374290