產(chǎn)甘油假絲酵母（Candida glycerinogenes）作為甘油高效工業(yè)化生產(chǎn)菌株,擁有獨(dú)特的耐高滲透壓、耐高溫高糖、耐有機(jī)酸等抗逆性強(qiáng)特點(diǎn),是潛在的合成生物學(xué)底盤工業(yè)微生物。該菌株在遺傳與分子生物學(xué)方面研究仍有許多空白,阻礙了對其工業(yè)應(yīng)用潛力的開發(fā)。酵母作為外源基因表達(dá)的重要真核表達(dá)系統(tǒng)之一,影響基因表達(dá)的因素有很多。本研究從密碼子偏好性、啟動子、mRNA二級結(jié)構(gòu)等對外源基因在該菌株中表達(dá)策略進(jìn)行研究,旨在為工業(yè)抗逆酵母改造、生產(chǎn)高附加值產(chǎn)品提供基礎(chǔ),本論文研究具體如下:為從密碼子偏好性優(yōu)化外源基因表達(dá),研究利用Codon-W分析C.glycerinogenes密碼子使用情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn),C.glycerinogenes平均GC含量為40.3%,GC3s平均含量為37.2%,最優(yōu)密碼子有25個且多以A/U結(jié)尾;通過表達(dá)不同來源外源基因GFP、ldhA、xylB、xylD、kivD發(fā)現(xiàn):GFP、ldhA密碼子偏好與宿主相似,易于成功表達(dá),而xylB、xylD、kivD的GC含量均大于65%,密碼子多以G/C結(jié)尾,CAI值均約為0.2,ENc值都在40以上,基因只轉(zhuǎn)錄不表達(dá),只有在密... 

【文章來源】：江南大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

重組表達(dá)載體的酶切驗(yàn)證M：DL2503marker；1：pUGAPU-xylB；2：pUGAPU-xylB1；3：pUGAPU-xylD1；

02xylDkivD相對xylB xylB、xylD 和 kivD 密碼子優(yōu)化后的基因轉(zhuǎn)pression levels of xylB、xylD and kivD after因在 C. glycerinogenes 中表達(dá)情況1、C.g-kivD、C.g-kivD1 和 C.g-ldhA。在圖 3-5 中，外源 ldhA 能夠成功的 GFP 在 C. glycerinogenes 中成功表 在 C.glycerinogenes 中只轉(zhuǎn)錄不表達(dá)C.g-kivD1 分別表達(dá)出約 27 kDa、67說明外源基因經(jīng)過密碼子優(yōu)化，提高 中實(shí)現(xiàn)成功表達(dá)。由此說明，外源基的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)。Zhou 等[15]發(fā)現(xiàn)基因密碼子的使用是基因表達(dá)的重要決

說明外源基因經(jīng)過密碼子優(yōu)化，提高基s 中實(shí)現(xiàn)成功表達(dá)。由此說明，外源基因中的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)。Zhou 等[15]發(fā)現(xiàn)基因密明密碼子的使用是基因表達(dá)的重要決定圖 3-5 重組菌中外源基因的 Western Blot 驗(yàn)證白 marker；1：C.g-xylB1；2：C.g-xylB；3：.g-xylD；5：C.g-kivD1；6：C.g-kivD；7：C.stern Blot verification of foreign genes in recomined protein marker; 1: C.g-xylB1; 2: C.g-xylB; 3: C.g-xylD; 5: C.g-kivD1; 6: C.g-kivD; 7: C.g-ld

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]利用熒光蛋白研究產(chǎn)甘油假絲酵母胞漿3-磷酸甘油脫氫酶基因CgGPD啟動子[J]. 丁春生,饒志明,諸葛斌,沈微,陳獻(xiàn)忠,方慧英,諸葛健.  微生物學(xué)報. 2008(08)
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碩士論文
[1]產(chǎn)甘油假絲酵母WL2002-5以18S rDNA為整合位點(diǎn)的表達(dá)體系的構(gòu)建[D]. 徐丹.江南大學(xué) 2014
[2]產(chǎn)甘油假絲酵母WL2002-5整合載體的構(gòu)建研究[D]. 高曉娜.江南大學(xué) 2012



本文編號：3352163