銀杏是地球上最古老的珍稀植物之一,黃酮類化合物是銀杏葉中重要的活性成分。本論文從貴州傳統(tǒng)發(fā)酵豆豉食品中分離篩選出兩株高產(chǎn)β-葡萄糖苷酶的菌株,利用酶水解轉(zhuǎn)化銀杏黃酮苷制備生物活性更高的苷元。通過丙酮沉淀法和反膠束萃取法相結(jié)合對粗酶液進(jìn)行純化得到電泳純的β-葡萄糖苷酶;其次,研究了純化后的β-葡萄糖苷酶的酶學(xué)性質(zhì),以期為酶的產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。最后,通過生物信息學(xué)的方法,以銀杏黃酮中幾種主要的苷類與β-葡萄糖苷酶在活性位點(diǎn)處進(jìn)行分子對接研究,分析了β-葡萄糖苷酶對銀杏黃酮具有高底物選擇性的原因及相關(guān)蛋白質(zhì)的功能。首先,以銀杏黃酮提取物為唯一碳源,利用梔子苷—谷氨酸鈉平板顯色法,篩選出兩株對銀杏黃酮苷具有高酶活力的菌株。隨后對兩株菌進(jìn)行了鏡檢、16S rRNA分子生物學(xué)鑒定及生理生化鑒定,鑒定菌株GUXN01為枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）,菌株GUYZ13為解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）。其次,采用丙酮沉淀和反膠束萃取相結(jié)合的方法分離純化β-葡萄糖苷酶,得到了丙酮沉淀的最佳工藝參數(shù)為:菌株GUYZ13當(dāng)丙酮與水解液的體積比為1:... 

【文章來源】：貴州大學(xué)貴州省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：118 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

銀杏黃酮苷元的基本結(jié)構(gòu)

圖 1.2 銀杏黃酮苷元的主要類型Figure 1.2 The main types of flavonoid aglycones銀杏葉提取物的化學(xué)成分繁多，已鑒定的達(dá) 160 余種。除了黃酮類物質(zhì)提取物還含有萜烯內(nèi)酯，聚異戊二烯醇，烷基酚和銀杏酸，以及營養(yǎng)素，糖類，氨基酸，維生素等），此外還有一些有機(jī)酸類(謝大年等，199銀杏黃酮的成分多種多樣，但黃酮和萜類化合物被認(rèn)為是主要的功能成

圖 2.2 復(fù)篩菌株產(chǎn)水解銀杏黃酮苷的 β-葡萄糖苷酶活力Fig.2.2 Activity of Beta-Glucosidase Producing Hydrolyzed Ginkgo Flavonoid Glycosidesby Double Screening Strain（3）加標(biāo)回收試驗結(jié)果加標(biāo)回收試驗結(jié)果見表 2.4 所示。由表 2.4 可見，通過加標(biāo)回收試驗得 3 株菌株的加標(biāo)回收率平均值基本維持在 95%左右，達(dá)到了一般加標(biāo)回收率實驗需達(dá)到 90%以上的標(biāo)準(zhǔn)（陳銀花等，2016）。通過加標(biāo)回收實驗驗證了 DNS 法測定 β-葡萄糖苷酶酶活力的準(zhǔn)確性。表 2.4 加標(biāo)回收驗證 3,5-二硝基水楊酸法的準(zhǔn)確性Table 2.4 Accuracy of the 3,5-dinitrosalicylic acid method菌株加標(biāo)回收率（%）回收率均值

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本文編號：3340057