安全、有效和穩(wěn)定的抗原和佐劑是疫苗研究的重點(diǎn)和難點(diǎn)。本課題面向滅活口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus,FMDV）抗原易發(fā)生裂解導(dǎo)致免疫活性降低的問(wèn)題,對(duì)影響滅活病毒顆粒結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性和免疫活性的因素和規(guī)律進(jìn)行了深入分析,提出利用過(guò)渡金屬離子和離子液體（Ionicliquids,ILs）增強(qiáng)病毒衣殼蛋白五聚體界面相互作用、避免顆粒解聚提高其穩(wěn)定性的新策略;并將抗原的穩(wěn)定策略和佐劑設(shè)計(jì)相結(jié)合,設(shè)計(jì)和制備了基于離子液體的新型O/IL納米乳液,提升了 FMDV疫苗的穩(wěn)定性和免疫應(yīng)答,并將研究結(jié)果拓展應(yīng)用于流感裂解疫苗佐劑的設(shè)計(jì)。主要研究結(jié)果和創(chuàng)新點(diǎn)如下:（1）發(fā)現(xiàn)過(guò)渡金屬離子Ni2+和Cu2+與146S（即結(jié)構(gòu)完整的FMDV）能發(fā)生特異性結(jié)合,且結(jié)合規(guī)律不同于非過(guò)渡金屬離子Ca2+。通過(guò)等溫滴定量熱、微量熱泳動(dòng)分析、以及ICP-MS分析,發(fā)現(xiàn)Ni2+、Cu2+和Ca2+三種離子均能與FMDV發(fā)生焓驅(qū)動(dòng)的自發(fā)性結(jié)合,即ΔG＜0,ΔH＜0、ΔS＜0。其中Cu2+與146S結(jié)合親和力最大;Ni2+和Cu2+在146S上的結(jié)合數(shù)量為Ca2+的10倍以上。（2）利用過(guò)渡金屬... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)科學(xué)院大學(xué)(中國(guó)科學(xué)院過(guò)程工程研究所)北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：173 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１?ＦＭＤＶ的衣殼及組成衣殼的亞基結(jié)構(gòu)??－

７?＼??ｅｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓ?Ｉｎｔｅｇｎｎ?ｒｅｃｅｐｔｏｒ?ＨＳ?ｒｅｃｅｐｔｏｉ＾＾ｅｎｄ〇Ｃｙｔ〇ＳｉＳ?／?／?／??ＣＹＴ〇ＰＬＡＳＭ??？ｃ，ａ＂，ｎｎ?ｃａｖｅｏｌａｅ?ｍｍｔ，ｒａｎ？?Ｖｅ?／?＼?ＶＰ２??一—?魯?Ｖ－５Ｌ－Ｖ??、?＾?ｕｎｋｏｗｎ?ｐａｔｈｗａｙ?＾??＾＾（ｌｙｓｉｓ?ｏｒ?ｐｅｍｉｅａｂｉｌｕａｌｉｏｎ？）＾＾＾?Ｙ１８５?＇?ｊ??Ｐ１８４＾Ｌ?Ｊ??ＲＮＡ?ｇｅｎｏｍｅ?＾?ＧＨ?ｌｏｏｐ?＾??圖１－２?ＦＭＤＶ與細(xì)胞表面受體結(jié)合的特點(diǎn)（ａ）?ＦＭＤＶ通過(guò)整合素受體和硫酸乙酰肝素??受體進(jìn)入細(xì)胞的途徑示意圖（ｂ）?ＦＭＤＶ衣殼表面整合素和硫酸乙酰肝素結(jié)合位點(diǎn)分布??（ｃ）?ＲＧＤ序列與整合素受體相互作用的分子機(jī)制⑷??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ?ｏｆ?ＦＭＤＶ?ｂｉｎｄｉｎｇ?ｔｏ?ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ?ｏｎ?ｃｅｌｌ?ｓｕｒｆａｃｅ?（ａ）?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｍｏｄｅｌ??ｏｆ?ｔｈｅ?ＦＭＤＶ?ｅｎｔｒｙ?ｐａｔｈｗａｙｓ?ｔｈｒｏｕｇｈ?ｉｎｔｅｇｒｉｎ?ｒｅｃｅｐｔｏｒ?ａｎｄ?ｈｅｐａｒｉｎ?ｓｕｌｆａｔｅ?（ＨＳ）?ｒｅｃｅｐｔｏｒ，??（ｂ）?Ｌｏｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｂｉｎｄｉｎｇ?ｓｉｔｅｓ?ｏｆ?ｉｎｔｅｇｒｉｎ?ａｎｄ?ＨＳ?ｏｎ?ｔｈｅ?ＦＭＤＶ?ｃａｐｓｉｄｓ，?（ｃ）?Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ??ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ?ｏｆ?ＲＧＤ?ｍｏｔｉｆ?ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ?ｗｉｔｈ?ｉｎｔｅｇｒｉｎ?ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ??１．１．２影響口蹄疫病毒穩(wěn)定性的因素??ＦＭＤＶ尤其是經(jīng)過(guò)滅活的ＦＭＤＶ顆粒結(jié)構(gòu)

?口蹄疫疫苗抗原的穩(wěn)定策略及新佐劑的設(shè)計(jì)???圖１－３?０型ＦＭＤＶ衣殼在儲(chǔ)存、加熱和低ｐＨ條件下裂解成１２Ｓ五聚體亞基的原子模型??示意圖？??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３?Ｓｕｒｆａｃｅ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ?ｏｆ?ａｔｏｍｉｃ?ｍｏｄｅｌｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＦＭＤＶ?Ｏ?ｓｅｒｏｔｙｐｅ?ｃａｐｓｉｄ?ａｎｄ?ｏｆ??ｉｔｓ?ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ?ｉｎｔｏ?１２?ｐｅｎｔａｍｅｒｉｃ?ａｓｓｅｍｂｌｉｅｓ?ｕｐｏｎ?ｓｔｏｒａｇｅ，?ｈｅａｔｉｎｇ?ｏｒ?ｌｏｗｅｒｉｎｇ?ｏｆ?ｐＨ??導(dǎo)致ＦＭＤＶ結(jié)構(gòu)不穩(wěn)的主要因素來(lái)自于其顆粒表面相鄰五聚體間的如下特??性：（１）五聚體間作用力弱：相鄰五聚體亞基之間主要通過(guò)疏水作用、靜電作??用和氫鍵等較弱的非共價(jià)鍵相互連接［３］；?（２）五聚體間大量的組氨酸分布：研究??表明，各種血清型的ＦＭＤＶ衣殼的相鄰五聚體間的ＶＰ２和ＶＰ３亞基存在著大量??保守的組氨酸位點(diǎn)，如ＶＰ３的Ｈ１４２和Ｈ１４５、ＶＰ２上的Ｈ１５７；同時(shí)位于五聚體??交界處的ＶＰ２亞基上還存在著ａ－螺旋的結(jié)構(gòu)ｆ１２］（圖ｌ－４ａ）。當(dāng)溶液ｐＨ小于組??氨酸的等電點(diǎn)時(shí)（約為６．８），組氨酸會(huì)因質(zhì)子化而帶正電，相鄰五聚體間的組??氨酸間的電荷排斥以及質(zhì)子化組氨酸和帶正電的ａ－螺旋間的電荷排斥導(dǎo)致了顆??粒的裂解［１２＿１６］。因此，通常當(dāng)溶液ｐＨ低于７．０時(shí)就能時(shí)導(dǎo)致ＦＭＤＶ的完全裂??解；（３）五聚體交界處酸性氨基酸的電荷排斥：Ｒｉｎｃｏｎ等認(rèn)為影響ＦＭＤＶ熱穩(wěn)??定性和耐酸穩(wěn)定性的分子機(jī)制不同，因?yàn)椋疲停模旨词乖谥行原h(huán)境中也容易發(fā)生??裂解，這是由于除了組氨酸，五聚體間還分布著大量的酸性氨基酸，如谷氨酸和?


本文編號(hào)：3319836