右旋糖酐是葡萄糖經(jīng)過(guò)脫水縮合形成的一種生物多糖,廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、化工、污水處理等多個(gè)領(lǐng)域,在這些領(lǐng)域中發(fā)揮很重要的作用。右旋糖酐的衍生物右旋糖酐鐵是一種臨床應(yīng)用價(jià)值較高的補(bǔ)鐵劑。本課題在用酶法制備并獲得低分子量右旋糖酐T5的基礎(chǔ)上,通過(guò)氧化反應(yīng)獲得氧化型右旋糖酐,隨后選用合適的氧化型右旋糖酐制備右旋糖酐鐵并優(yōu)化合成工藝,同時(shí),對(duì)氧化型右旋糖酐和右旋糖酐鐵的理化性質(zhì)進(jìn)行研究和分析。研究?jī)?nèi)容及分析結(jié)果如下:1、本課題對(duì)重組畢赤酵母產(chǎn)右旋糖酐酶的工藝進(jìn)行進(jìn)一步優(yōu)化,隨后對(duì)酶的熱穩(wěn)定性和酶法制備低分子量右旋糖酐進(jìn)行研究。其中產(chǎn)右旋糖酐酶的最適工藝條件是每24h添加0.25%山梨醇和0.62%甲醇,pH值為5.08。在探究孵育溫度對(duì)右旋糖酐酶活力的半衰期的影響實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),30℃溫度條件是比較適合右旋糖酐酶的長(zhǎng)時(shí)間催化反應(yīng)。通過(guò)研究底物濃度、酶濃度和反應(yīng)時(shí)間對(duì)右旋糖酐酶催化降解高分子量右旋糖酐的影響實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)底物濃度過(guò)大不利于此酶催化反應(yīng),酶濃度的增加會(huì)影響底物降解速率,反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)雖然會(huì)使底物降解得更多,但是降解速率會(huì)隨之減小。右旋糖酐酶對(duì)右旋糖酐的親和力隨其分子量的減小而降低。5%底物... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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圖１．４本研究的實(shí)驗(yàn)方案??Ｆｉｇ?１．４?Ｔｈｅ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ?ｓｃｈｅｍｅ?ｏｆ?ｔｈｉｓ?ｓｔｕｄｙ??１２??

合肥工業(yè)大學(xué)學(xué)術(shù)碩士研究生學(xué)位論文??２．４．２右旋糖酐酶的熱穩(wěn)定性??１００?ｐ?＊??，—??＊?——?－?■?２５°Ｃ??９?＼?？?３０ｔ??＾９０?－?…?＼?▲?３宂??Ｉ０－??＿ｒ??＇??Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ??ｌｈ?２ｈ?４ｈ?５ｈ?６ｈ?ｌＯｈ?１６ｉｉ?１８ｈ?２０ｈ?２４ｈ?２ｄａｙ?３ｄａｙ?４ｄａｙ?６ｄａｙ?８ｄａｙ?ｌＯｄａｙ?１９ｄａｙ?２３ｄａｙ?２６ｄａｙ??Ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ?ｔｉｍｅ??圖２．２不同溫度對(duì)右旋糖酐酶活力的影響??Ｆｉｇ?２．２?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?ｏｎ?ｄｅｘｔｒａｎａｓｅ?ａｃｔｉｖｉｔｙ??從圖２．２中可以看到，隨著溫度的上升右旋糖酐酶的穩(wěn)定性在減弱，其中在２５°Ｃ??下保溫，酶的穩(wěn)定性最好，在保溫２６ｄａｙ時(shí)達(dá)到了酶的半衰期；在３０°Ｃ下保溫，??在保溫８ｄａｙ時(shí)達(dá)到了酶的半衰期；在３５°Ｃ下保溫，在保溫２４ｈ時(shí)達(dá)到了酶的半衰??期。所以如果要保障酶的穩(wěn)定性，應(yīng)該選用２５°Ｃ和３０°Ｃ，但是在前期的研究中也??有指出（以最適溫度下的酶活力效應(yīng)為１００％）在一定時(shí)間內(nèi)，在２５°Ｃ下右旋糖酐??酶催化右旋糖酐Ｔ７０水解反應(yīng)中只能發(fā)揮大約８２％的酶活力效應(yīng)，而３０°Ｃ該酶能??夠發(fā)揮大約９８％的酶活力效應(yīng)。所以用來(lái)研宄右旋糖酐酶的長(zhǎng)時(shí)間催化情況，可??選用３０°Ｃ溫度條件進(jìn)行酶催化反應(yīng)。??２４??

?，??２００?■?：?＾：?ＩＳ：??１００?■?ｉ?ｍ＿＿＿?＾?＿＿＿—▲丨?２０」?ｓ??〇」?�。�，＂７７７Ｚｒ７Ｔ７．ｆ?；?ｉ?ＴＴＴＴ＾Ｐ－．－．；?ｌｏ－?、＾■?－ｔ＾?￣?￣ｔ??１?ｉ?■?ｉ?■?ｉ?■?ｉ?■?０?＇?ｉ?１?ｊ?１?ｉ?１?ｉ?１??０．５ｈ?ｌｈ?１．５ｈ?２ｈ?〇．５ｈ?ｌｈ?ｌ．５ｈ?２ｈ??Ｒｅｃａｔｉｏｎ?ｔｉｍｅ?Ｒｅｃａｔｉｏｎ?ｔｉｍｅ??圖２．３不同底物濃度下酶催化右旋糖酐的分子《：變化??Ｆｉｇ?２．３?Ｅｎｚｙｍｅ－ｃａｔａｌｙｚｅｄ?ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｗｅｉｇｈｔ?ｃｈａｎｇｅｓ?ｏｆ?ｄｅｘｔｒａｎ?ａｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｓｕｂｓｔｒａｔｅ??ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ??圖２．３中顯示，在５Ｕ／ｍｌ右旋糖酐酶的條件下，１％、２．５％、５％，７．５％和１０％??的高分子右旋糖酐溶液，進(jìn)行〇．５ｈ酶水解反應(yīng)后，分子量分別降到大約２０ｋＤａ、??５１ｋＤａ、２５１ｋＤａ、４５１７ｋＤａ和４７９５ｋＤａ，說(shuō)明底物濃度越低，右旋糖酐分子量降解越??快。由于高分子量右旋糖酐的濃度越大其粘度也越大，底物溶液粘度過(guò)高會(huì)影響反??應(yīng)中酶在底物溶液中的流動(dòng)性，造成高分子量右旋糖酐與右旋糖酐酶的結(jié)合困難，??酶的活動(dòng)區(qū)域有限，會(huì)影響酶的總體水解反應(yīng)速率。隨著反應(yīng)的繼續(xù)進(jìn)行，可以看??到在０．５ｈ至ｌｈ的反應(yīng)時(shí)間內(nèi)，１％和２．５％的降解速度要５％、７．５％和１０％的降解??速度慢很多，這是因?yàn)橛倚囚附?jīng)過(guò)一段時(shí)間的降解，對(duì)于低濃度底物體系而言，??高分子量右旋糖酐己經(jīng)降解成中、低分

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]棘孢青霉右旋糖酐酶基因克隆、表達(dá)及酶學(xué)研究[D]. 吳敏.合肥工業(yè)大學(xué) 2018
[2]低分子量右旋糖酐的氧化機(jī)制及右旋糖酐鐵的制備研究[D]. 陳爽.合肥工業(yè)大學(xué) 2018



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