脯氨酸氨肽酶（PAP;E.C.3.4.11.5）是一種能特異地水解蛋白質(zhì)或多肽N端脯氨酸殘基的外肽酶,其在食品蛋白質(zhì)水解脫苦、生物活性肽制備方面有著重要應(yīng)用,同時在生物醫(yī)藥、檢測方面的應(yīng)用前景潛力巨大。本論文將來源于米曲霉的脯氨酸氨肽酶cDNA為模板,成功構(gòu)建了產(chǎn)帶有組氨酸標簽的脯氨酸氨肽酶的重組枯草芽孢桿菌。培養(yǎng)基經(jīng)單因素及正交實驗獲得優(yōu)化組合:酵母膏60 g·L^-1,葡萄糖20 g·L^-1,魚粉蛋白胨18.75 g·L^-1,NH₄Cl 6.25 g·L^-1,KH₂PO₄ 2.31 g·L^-1,K₂HPO₄ 12.54 g·L^-1。優(yōu)化后PAP總酶活達到103.1 U·mL^-1。添加0.1%的植酸到培養(yǎng)基中PAP總酶活提高到111.1U·m L^-1。搖瓶培養(yǎng)條件優(yōu)化為初始pH 7.0、4%接種量、50 ... 

【文章來源】：江南大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒構(gòu)建流程圖

電泳結(jié)果如圖 3-2所示。從圖可以看出轉(zhuǎn)化子中重組質(zhì)粒為模板的 PCR 產(chǎn)物與原 PCR 產(chǎn)物條帶一致（圖3-2 a），進一步雙酶切得到兩個條帶，其中一條與 PCR 產(chǎn)物條帶一致（圖 3-2 b），表明重組質(zhì)粒構(gòu)建成功，將重組質(zhì)粒送生工測序，結(jié)果與原序列一致無堿基突變，可以進行下步工作。

圖 3-2 轉(zhuǎn)化子中重組質(zhì)粒 PCR 擴增（a）和重組質(zhì)粒雙酶切驗證（b）2：Marker；1~4：轉(zhuǎn)化子中重組質(zhì)粒的 PCR；5：PCR 產(chǎn)物；b：M1、M2：MBamH I 單酶切；2：Mlu I 單酶切；3：BamH I 和 Mlu I 雙酶切；4：PCR 產(chǎn)物CR amplification of recombinant plasmid from transformants (a) and identificationrecombinant plasmid digested by BamH I and Mlu I (b)Marker; 1~4: PCR of recombinant his tag -pap from transformants; 5: PCR producter; 1: digested by BamH I; 2: digested by Mlu I; 3: digested by BamH I and Mlu I; 4products粒轉(zhuǎn)化 B. subtilis WB600質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化 B. subtilis WB600 感受態(tài)細胞，在 LBK 平板上篩選轉(zhuǎn)化行菌落 PCR 及提取重組質(zhì)粒雙酶切驗證，結(jié)果如圖 3-3 所示。

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3255272