植物病原真菌引起的植物病害給我國糧食生產帶來巨大的經濟損失,由于化學農藥的使用對生態(tài)環(huán)境及人類生存造成了巨大威脅,人們將目標逐漸轉向更為安全的生物農藥。而微生物來源的生物農藥因其來源廣泛、工藝簡單、不易產生耐藥性等優(yōu)良特征而被廣泛關注。本研究擬從深海微生物中篩選對植物病原真菌具有強烈抑制作用的微生物菌株,并對其進行相關研究,其內容如下:本實驗從深海沉積物中分離到大量的海洋細菌菌株,并以稻瘟病菌（Magnaporthe grisea）為指示菌篩選到兩株對植物病原真菌具有強烈抑制效果的菌株,根據16S rRNA序列測定將此兩菌株分別命名為Bacillus sp.wsm-1和Bacillus sp.CS30。發(fā)酵液經酸化、甲醇浸提、硅膠柱層析和反相高效液相色譜（RP-HPLC）得到了較純的抗菌物質。氨基酸組成分析和串聯(lián)質譜分析表明Bacillus sp.wsm-1產生的生物活性物質為兩個相差一個-CH₂的iturin類環(huán)狀脂肽,屬于同系物,其氨基酸序列為β-氨基脂肪酸-天冬酰胺-絲氨酸-天冬酰胺-脯氨酸-酪氨酸-天冬酰胺-谷氨酰胺,與之前報導的iturin類脂肽序列存在... 

【文章來源】：青島大學山東省

【文章頁數】：70 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

菌株wsm-1對植物病原真菌（稻瘟病菌A、腐皮鐮刀菌B、尖孢鐮刀菌C、炭疽菌D和交鏈孢霉菌E）的抑制情況測定

表明菌株wsm-1的16SrRNA序列與B.velezensisCBMB205(99.78%)和B.amyloliquefaciensLx-11(99.78%)具有高度同源性，故將其菌株鑒定為Bacillussp.wsm-1；菌株CS30的16SrRNA序列與B.teqililensisstrainJS5L（99.93%）和B.subtilisKACC15929（99.86%）具有高度同源性，該菌株被命名為Bacillussp.CS30。此外，我們還用MEGA6.0軟件構建此兩菌株的系統(tǒng)發(fā)育進化樹（圖2.2），進一步驗證了二者與芽胞桿菌在進化上非常接近。兩株菌株的16SrRNA信息已提交至GenBank，其編號分別為MT107176和MH793466。圖2.2Bacillussp.wsm-1和Bacillussp.CS30的16SrRNA系統(tǒng)發(fā)育進化樹。Fig.2.2Phylogenetictreeof16SrDNAofBacillussp.wsm-1andBacillussp.CS30.2.4實驗小結為了探究南海冷泉沉積物中所含的海洋細菌的情況，我們做了相關的分離篩選及鑒定試驗，所得結果表明，在南海深海冷泉環(huán)境下有著大量的可培養(yǎng)的海洋細菌，BacillusamyloliquefaciensstrainLx-11(HQ179100)BacillusvelezensisstrainCBMB205(NR116240)Bacillussp.WSM-1(MT107176)Bacillussp.CS30(MH793466)BacillustequilensisstrainJS5L(KX129852)Bacillussubtilissubsp.subtilisstrainKACC15929(MK240359)BacillaceaebacteriumenrichmentculturecloneWSC-48BacillusmarisflavistrainTF-11BacillusvietnamensisGeobacillussp.1024BacillusmethanolicusNCIMB13113TVirgibacillussp.BAB-2671Tumebacillussp.SYSUS10001AlicyclobacillaceaebacteriumJAM-FM0301Tumebacillussp.LX77Halophilicbacterium15Bisolate15BAlicyclobacillaceaebacteriumFeSo-N4-1-CHKyrpidiatusciaeDSM2912AlicyclobacillushesperidumURH17-3-68URH17368ctg73Effusibacilluspohl

青島大學碩士學位論文22圖3.1Bacillussp.wsm-1（A）和Bacillussp.CS30（B）產生的抗菌活性物質的HPLC色譜圖。Fig.3.1HPLCchromatogramoftheantifungalagentsproducedbyBacillussp.wsm-1（A）andBacillussp.CS30（B）.3.3.4活性物質的氨基酸分析據相關文獻資料信息，我們初步推測這兩個活性物質是脂肽類物質，為了進一步確定其結構，我們測定了Bacillussp.wsm-1產生的抗真菌物質的氨基酸組成。對Bacillussp.wsm-1所產生的活性物質，在HPLC分離過程中從25.8分鐘洗脫的主要活性組分進行了氨基酸組成分析。如圖3.2B所示，僅檢測到5種氨基酸，即天冬氨酸、谷氨酸、絲氨酸、脯氨酸和酪氨酸。由于天冬酰胺和谷氨酰胺在樣品處理時易于轉變?yōu)樘於彼岷凸劝彼�，所以抗真菌劑含有的氨基酸種類可能為：天冬酰胺或天冬氨酸、谷氨酸或谷氨酰胺、絲氨酸、脯氨酸和酪氨酸，進一步鑒別還需結合質譜信息來確定氨基酸的組成。

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本文編號：3251970