ε-聚賴氨酸即多賴氨酸聚合物,主要被用作食品防腐劑。ε-聚賴氨酸優(yōu)勢很廣,重要的特質(zhì)主要體現(xiàn)在三個方面:熱穩(wěn)定性、降解性、抑菌譜。很多國家已經(jīng)承認ε-聚賴氨酸的使用,如日本、美國、中國。本文目的是提高ε-聚賴氨酸產(chǎn)生菌Streptomyces albulus（S.albulus）M-Z18的產(chǎn)量,利用復(fù)合育種策略,最后成功獲得一株突變菌株S.albulus RA-G16。研究內(nèi)容主要包括三個方面:（1）利用核糖體工程技術(shù)選育ε-聚賴氨酸高產(chǎn)菌株。核糖體工程常用的抗生素有鏈霉素、遺傳霉素、慶大霉素、利福平、巴龍霉素、林可霉素、硫鏈絲菌素和夫西地酸8種,微生物種類不同,對每一種抗生素的耐受性也存在差別。首先篩選M-Z18的有效抗生素,找出對M-Z18具有抑制效果的抗生素,結(jié)果表明,除硫鏈絲菌素和夫西地酸之外的其余6種抗生素均能明顯抑制M-Z18的生長;然后測定有效抗生素對M-Z18的最小抑菌濃度,確定出菌種選育的篩選濃度,并構(gòu)建突變菌庫。最終得到多株ε-聚賴氨酸高產(chǎn)菌株,通過傳代培養(yǎng)考察突變菌株的遺傳穩(wěn)定性,包括孢子生長能力和發(fā)酵性能兩方面,結(jié)果表明,只有鏈霉素抗性突變菌株、遺傳霉素抗性突... 

【文章來源】：江南大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 ε-聚賴氨酸的研究進展
        1.1.1 ε-聚賴氨酸的簡介
        1.1.2 ε-聚賴氨酸的分子結(jié)構(gòu)
        1.1.3 ε-聚賴氨酸的理化性質(zhì)
        1.1.4 ε-聚賴氨酸的抑菌譜和抑菌機理
        1.1.5 ε-聚賴氨酸的實際應(yīng)用
    1.2 ε-聚賴氨酸菌種選育研究進展
        1.2.1 ε-聚賴氨酸產(chǎn)生菌的篩選
        1.2.2 ε-聚賴氨酸產(chǎn)生菌的誘變
    1.3 核糖體工程育種技術(shù)
        1.3.1 核糖體工程簡介
        1.3.2 核糖體工程的原理
        1.3.3 核糖體工程的應(yīng)用
    1.4 常壓室溫等離子體(ARTP)誘變育種技術(shù)
        1.4.1 ARTP誘變的原理
        1.4.2 ARTP誘變的應(yīng)用實例
    1.5 基因組重排(Genome Shuffling)育種技術(shù)
        1.5.1 Genome Shuffling的原理
        1.5.2 Genome Shuffling的優(yōu)勢
        1.5.3 Genome Shuffling的應(yīng)用
        1.5.4 Genome Shuffling的發(fā)展前景
    1.6 本論文研究目的、意義和內(nèi)容
        1.6.1 研究目的和意義
        1.6.2 研究內(nèi)容
第二章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗菌株
        2.1.2 培養(yǎng)基及溶液
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 主要試劑
    2.2 核糖體工程技術(shù)選育ε-聚賴氨酸高產(chǎn)菌株
        2.2.1 菌株培養(yǎng)
        2.2.2 單孢子懸浮液制備
        2.2.3 有效抗生素測定
        2.2.4 最小抑菌濃度測定
        2.2.5 ε-聚賴氨酸濃度測定
        2.2.6 核糖體工程選育ε-聚賴氨酸高產(chǎn)菌株
    2.3 ARTP誘變技術(shù)選育ε-聚賴氨酸高產(chǎn)菌株
        2.3.1 ARTP工作條件
        2.3.2 ARTP工作流程
        2.3.3 ARTP誘變致死率測定
        2.3.4 ARTP誘變選育ε-聚賴氨酸高產(chǎn)菌株
    2.4 Genome Shuffling技術(shù)選育ε-聚賴氨酸高產(chǎn)菌株
        2.4.1 原生質(zhì)體的制備與再生
        2.4.2 原生質(zhì)體的制備、滅活與融合再生條件優(yōu)化
        2.4.3 融合子的挑選
第三章 結(jié)果與討論
    3.1 核糖體工程技術(shù)選育ε-聚賴氨酸高產(chǎn)菌株
        3.1.1 有效抗生素測定
        3.1.2 最小抑菌濃度測定
        3.1.3 核糖體工程選育ε-聚賴氨酸高產(chǎn)菌株
        3.1.4 突變菌株遺傳穩(wěn)定性考察
    3.2 ARTP誘變技術(shù)選育ε-聚賴氨酸高產(chǎn)菌株
        3.2.1 ARTP誘變致死率測定
        3.2.2 ARTP誘變選育ε-聚賴氨酸高產(chǎn)菌株
        3.2.3 突變菌株遺傳穩(wěn)定性考察
    3.3 Genome Shuffling技術(shù)選育ε-聚賴氨酸高產(chǎn)菌株
        3.3.1 菌株生長曲線的測定
        3.3.2 原生質(zhì)體制備與再生的菌齡
        3.3.3 原生質(zhì)體制備與再生的酶系和酶濃度
        3.3.4 原生質(zhì)體制備與再生的酶解時間
        3.3.5 原生質(zhì)體的制備
        3.3.6 原生質(zhì)體滅活致死率的測定
        3.3.7 聚乙二醇6000融合時間對原生質(zhì)體融合率的影響
        3.3.8 高產(chǎn)融合子的篩選
        3.3.9 高產(chǎn)融合子遺傳穩(wěn)定性考察
    3.4 比較三種菌種選育手段
主要結(jié)論與展望
致謝
參考文獻
附錄:作者在攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]核糖體工程選育ε-聚賴氨酸高產(chǎn)菌及發(fā)酵pH調(diào)控策略優(yōu)化[D]. 吳光耀.江南大學 2016



本文編號：3205660