蔗糖異構(gòu)酶（Surcose Isomerase,SIase）能將蔗糖分子內(nèi)的α-1,2-糖苷鍵轉(zhuǎn)位形成α-1,6-糖苷鍵或α-1,1-糖苷鍵,從而得到異麥芽酮糖或海藻酮糖,根據(jù)其主產(chǎn)物不同也被稱作異麥芽酮糖合酶或海藻酮糖合酶。異麥芽酮糖與蔗糖在甜度、溶解度等物理性質(zhì)比較相近。相對于蔗糖而言,異麥芽酮糖具有防齲齒、預(yù)防糖尿病、抗疲勞、易吸收等特點。生物酶法制備異麥芽酮糖轉(zhuǎn)化率較高,反應(yīng)條件溫和,產(chǎn)物易分離,符合綠色環(huán)保的要求。本研究基于前期構(gòu)建的產(chǎn)蔗糖異構(gòu)酶重組菌Brevibacillus choshinensis/pNCMO2-SI,通過對搖瓶和3-L罐培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化,并進(jìn)一步篩選啟動子提高了酶產(chǎn)量。同時將蔗糖異構(gòu)酶基因在宿主菌Bacillus subtilis WSH11中進(jìn)行表達(dá),同時比較兩個表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)劣性。主要研究結(jié)果如下:（1）通過搖瓶優(yōu)化,確定了重組菌B.choshinensis/pNCMO2-SI最佳培養(yǎng)條件為:葡萄糖10 g·L^-1,多聚蛋白胨8.5 g·L^-1,牛肉浸膏8.5 g·L^-1,NH

【文章來源】：江南大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 蔗糖異構(gòu)酶的概述
        1.1.1 蔗糖異構(gòu)酶的來源
        1.1.2 蔗糖異構(gòu)酶的酶學(xué)性質(zhì)
        1.1.3 蔗糖異構(gòu)酶的制備
    1.2 異麥芽酮糖的概述
        1.2.1 異麥芽酮糖的理化性質(zhì)
        1.2.2 異麥芽酮糖的功能
        1.2.3 異麥芽酮糖的生產(chǎn)
    1.3 短短芽孢桿菌的概述
    1.4 枯草芽孢桿菌的概述
    1.5 立題依據(jù)與研究意義
    1.6 主要研究內(nèi)容
第二章 材料與方法
    2.1 菌種及質(zhì)粒
    2.2 主要試劑
    2.3 主要儀器
    2.4 培養(yǎng)基
    2.5 分子生物學(xué)操作
        2.5.1 不同重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
        2.5.2 E.coli感受態(tài)細(xì)胞的制備及化學(xué)法轉(zhuǎn)化
        2.5.3 短短芽孢桿菌感受態(tài)的制備及電擊轉(zhuǎn)化
        2.5.4 枯草芽孢桿菌感受態(tài)的制備及電擊轉(zhuǎn)化
    2.6 發(fā)酵方法
        2.6.1 不同重組短短芽孢桿菌的發(fā)酵培養(yǎng)
        2.6.2 不同重組枯草芽孢桿菌的發(fā)酵培養(yǎng)
    2.7 分析方法
        2.7.1 細(xì)胞濃度的測定
        2.7.2 DNA瓊脂糖凝膠電泳
        2.7.3 SDS-PAGE分析
        2.7.4 蔗糖異構(gòu)酶的酶活測定
        2.7.5 蛋白酶酶活的測定
        2.7.6 蛋白濃度的測定
        2.7.7 葡萄糖的測定
        2.7.8 殘氮的測定
第三章 結(jié)果與討論
    3.1 重組菌B.choshinensis/pNCMO2-SI的發(fā)酵優(yōu)化
        3.1.1 重組菌B.choshinensis/pNCMO2-SI的搖瓶優(yōu)化
        3.1.2 重組菌B.choshinensis/pNCMO2-SI的3-L發(fā)酵罐優(yōu)化
    3.2 啟動子對蔗糖異構(gòu)酶在短短芽孢桿菌中重組表達(dá)的影響
        3.2.1 含不同啟動子重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與重組酶的表達(dá)
        3.2.2 含不同啟動子重組菌的搖瓶優(yōu)化
        3.2.3 含不同啟動子重組菌的3-L罐發(fā)酵
        3.2.4 重組短短芽孢桿菌發(fā)酵過程蛋白酶對酶活的影響分析
    3.3 蔗糖異構(gòu)酶基因在枯草芽孢桿菌中的表達(dá)
        3.3.1 重組菌BSpBS-SI的構(gòu)建與表達(dá)
        3.3.2 重組菌BSpHY-SI的構(gòu)建與表達(dá)
        3.3.3 重組菌BSpBS-SI的發(fā)酵優(yōu)化
主要結(jié)論與展望
    主要結(jié)論
    展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄 ：作者在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文



本文編號：3192992