1,2,4-丁三醇（1,2,4-butanetriol,BT）是一種平臺化合物,其性質(zhì)與甘油相似,廣泛地應(yīng)用于軍工、醫(yī)藥和化妝品等領(lǐng)域,但BT不是天然的生物產(chǎn)物,生物合成研究也尚在起步階段,前期研究我們利用合成生物學(xué)構(gòu)建了產(chǎn)BT菌株并發(fā)現(xiàn)BT在胞內(nèi)有積累可能影響其合成,同時,其發(fā)酵尚需完善且下游分離技術(shù)研究極少。因此,本研究通過異源表達(dá)耐藥結(jié)節(jié)分化家族（resistance nodulation and cell division,RND）外排泵基因、優(yōu)化5 L發(fā)酵罐中培養(yǎng)條件和探索BT的分離工藝,以期提高BT產(chǎn)量,探索工業(yè)上生物合成法生產(chǎn)BT的技術(shù)路線。為加強(qiáng)BT的外排從而促進(jìn)BT的合成,研究利用來自克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）和銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）的RND外排泵基因acrA、acrB、acrE、acrF、tolC、mexA、mexB、mexE、mexF、oprN、oprM和多基因組合的acrAB、acrEF、acrAB-tolC、acrEF-tolC、mexAB、mexEF、mexAB-oprM、mexEF-opr... 

【文章來源】：江南大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 1,2,4-丁三醇的研究現(xiàn)狀
        1.1.1 1,2,4-丁三醇特性及其應(yīng)用
        1.1.2 化學(xué)法合成BT
        1.1.3 生物法生產(chǎn)BT
    1.2 外排泵蛋白的研究進(jìn)展
    1.3 傳統(tǒng)生物基產(chǎn)品的提取方法
    1.4 雙水相萃取技術(shù)及其應(yīng)用
    1.5 課題立題意義與研究內(nèi)容
        1.5.1 立題意義
        1.5.2 主要研究內(nèi)容
第二章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 菌株與質(zhì)粒
        2.1.2 實驗試劑與酶
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 培養(yǎng)基
    2.2 方法
        2.2.1 培養(yǎng)方法
        2.2.2 生物量與代謝產(chǎn)物的檢測方法
        2.2.3 引物設(shè)計
        2.2.4 細(xì)菌基因組的提取方法
        2.2.5 目的基因片段的PCR擴(kuò)增反應(yīng)與純化
        2.2.6 表達(dá)載體的構(gòu)建方法
        2.2.7 E.coli感受態(tài)細(xì)胞制備
        2.2.8 E.coli感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化
        2.2.9 胞內(nèi)物質(zhì)的測定
        2.2.10 蛋白表達(dá)情況的測試
        2.2.11 BT的雙水相萃取方法
        2.2.12 計算公式
第三章 結(jié)果與討論
    3.1 BT工程菌株外排通道強(qiáng)化
        3.1.1 利用來自K.pneumoniae的RND蛋白對BT外排強(qiáng)化
        3.1.2 利用來自P.aeruginosa的RND蛋白對BT外排強(qiáng)化
        3.1.3 多基因強(qiáng)化對BT外排
        3.1.4 外排泵蛋白基因的蛋白表達(dá)
    3.2 強(qiáng)化BT外排蛋白菌株的發(fā)酵
        3.2.1 強(qiáng)化BT外排泵蛋白菌株5L發(fā)酵罐分批發(fā)酵
        3.2.2 補(bǔ)料方式對BT產(chǎn)量的影響
        3.2.3 補(bǔ)料碳氮比對BT產(chǎn)量的影響
    3.3 雙水相技術(shù)分離發(fā)酵液中BT的初步探索
        3.3.1 萃取分離BT雙水相體系的篩選及體系相圖的繪制
2HPO₄質(zhì)量分?jǐn)?shù)對BT萃取效率的影響">        3.3.2 雙水相體系中無水乙醇/K₂HPO₄質(zhì)量分?jǐn)?shù)對BT萃取效率的影響
        3.3.3 pH對BT萃取效率的影響
        3.3.4 500g雙水相體系萃取效果評價
主要結(jié)論與展望
    主要結(jié)論
    展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄:作者在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3153621