單抗是重要的生物技術(shù)藥物,現(xiàn)有的蛋白A親和層析的抗體純化平臺(tái)技術(shù)無(wú)法滿足巨大的抗體市場(chǎng)需求,有必要開(kāi)發(fā)新的分離方法。連續(xù)流層析是一種新型層析分離模式,是生物連續(xù)制造的重要環(huán)節(jié),但對(duì)相關(guān)影響因素的研究還不夠深入。本文圍繞雙柱連續(xù)流層析捕獲抗體,探討連續(xù)流層析分離的關(guān)鍵因素,比較傳統(tǒng)批次層析和連續(xù)流層析的分離性能,分析不同蛋白A親和介質(zhì)在連續(xù)流層析分離單抗過(guò)程中的表現(xiàn),為連續(xù)流層析過(guò)程開(kāi)發(fā)和應(yīng)用提供指導(dǎo)。以典型蛋白A親和介質(zhì)MabSelect SuRe與兩種新型介質(zhì)（Resin A和Resin B）為模型,考察了保留時(shí)間和蛋白濃度對(duì)雙柱連續(xù)流層析過(guò)程的影響。結(jié)果表明,隨保留時(shí)間增加,三種介質(zhì)的產(chǎn)率都呈現(xiàn)先增加后減小的趨勢(shì),介質(zhì)利用率則持續(xù)增加,雙柱連續(xù)流層析的介質(zhì)利用率（70%以上）遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于批次層析過(guò)程（20～50%）,緩沖液消耗降低50%以上。而隨著蛋白濃度增大,產(chǎn)率顯著增大,介質(zhì)利用率和緩沖液消耗則變化不大。比較三種介質(zhì),Resin B載量最高,擁有最好的分離性能,保留時(shí)間1 min時(shí)產(chǎn)率達(dá)到43.0 g/（L·h）�？疾炝巳N介質(zhì)用連續(xù)流層析從細(xì)胞培養(yǎng)液中分離單抗,結(jié)果顯示單抗純度、... 

【文章來(lái)源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：108 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．３模擬移動(dòng)床示意圖??Ｆｉｇ．?１．３?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ａ?ｓｉｍｕｌａｔｅｄ?ｍｏｖｉｎｇ?ｂｅｄ??

（１）雙柱連續(xù)流層析Ｃａｐｔｕｒｅ?ＳＭＢ系統(tǒng)??ＣｈｒｏｍａＣｏｎ公司推出雙柱連續(xù)流層析Ｃａｐｔｕｒｅ?ＳＭＢ系統(tǒng)，使用兩根層析進(jìn)??行連續(xù)操作，被認(rèn)為是最精簡(jiǎn)的連續(xù)流層析系統(tǒng)，具體步驟如圖１．４所示。首先，??兩根層析柱（１＃和２＃）以串聯(lián)方式上祥（如圖１．４中Ｓｔｅｐ?１），１＃層析柱流穿的??蛋白被２＃層析柱吸附；當(dāng)１＃層析柱迗到設(shè)定的穿透點(diǎn)，將１＃層析柱未吸附的蛋??白沖洗到２＃層析柱，如圖１．４中Ｓｔｅｐ２；然后將兩根層析柱斷開(kāi)，１＃層析柱進(jìn)行??淋洗、洗脫、再生、再平衡等步驟（ｒｅｃｏｖｅｒｙ－ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，?Ｒ－Ｒ），與此同時(shí)２＃層??析柱繼續(xù)上樣，如圖１．４中Ｓｔｅｐ３所示，此時(shí)２＃層析柱的上樣流速通常比雙柱連??接模式上樣時(shí)的流速低，以保證蛋白不會(huì)從２＃層析柱中流穿；待１＃層析柱完成??所有洗脫和再生步驟，將１＃層析柱串聯(lián)至２＃層析柱后，２＃層析柱持續(xù)上樣，該??過(guò)程與Ｓｔｅｐ?１類似

ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，?ＰＣＣ），包括３Ｃ－ＰＣＣ和４Ｃ－ＰＣＣ兩種不同模式，分別使用３根??及４根層析柱。??３Ｃ－ＰＣＣ系統(tǒng)的具體步驟如圖１．５所示，與Ｃａｐｔｕｒｅ?ＳＭＢ類似，也是采用兩??根層析柱串聯(lián)上樣。首先，前兩根層析柱（１＃和２＃）串聯(lián)，進(jìn)行上樣，］＃層析柱??流穿的蛋白被２＃層析柱吸附，；與此同時(shí)３＃層析柱進(jìn)行淋洗、洗脫、再生、再平??衡等步驟，如圖１．５中Ｓｔｅｐｌ；當(dāng)３＃層析柱再生完畢，１＃層析柱也達(dá)到預(yù)設(shè)的上??樣量，將１＃層析柱與３＃層析柱串聯(lián)，將１＃層析柱中未吸附的蛋白沖洗到３＃層析??柱，與此同時(shí)上樣切換到２＃層析柱，以恒定速度上樣，如圖１．５中Ｓｔｅｐ２；待１＃??層析柱沖洗完畢，斷開(kāi)１＃層析柱與３＃層析柱，連接２＃層析柱與３＃層析柱，持續(xù)??上樣，１＃層析柱進(jìn)行淋洗、洗脫、再生、再平衡等步驟，如圖１．３中Ｓｔｅｐ?３。然??后重復(fù)以上步驟

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雙柱連續(xù)流層析親和分離抗體的過(guò)程設(shè)計(jì)與應(yīng)用[J]. 高宗曄,史策,姚善涇,林東強(qiáng).  高�；瘜W(xué)工程學(xué)報(bào). 2019(01)
[2]逆體積排阻層析法測(cè)定層析介質(zhì)的孔徑分布[J]. 沈醉,林東強(qiáng),姚善涇.  化工學(xué)報(bào). 2010(04)

博士論文
[1]混合模式介質(zhì)吸附抗體的選擇性及分離應(yīng)用研究[D]. 羅穎娣.浙江大學(xué) 2018



本文編號(hào)：3138034