D-葡萄糖二酸是用于合成其他增值化學(xué)品或商品化學(xué)品的一種很有前景的平臺化合物。目前部分化學(xué)法合成D-葡萄糖二酸已投入生產(chǎn),微生物方面研究還不夠成熟。在代謝工程大腸桿菌中嘗試將D-葡萄糖轉(zhuǎn)化為D-葡萄糖二酸的方法已經(jīng)探究了很多年。其中,單糖發(fā)酵的效果不明顯,得率很低,后期分離純化困難。在混糖發(fā)酵中D-葡萄糖二酸產(chǎn)量增加,正因如此這種方法之后獲得了研究者極大的關(guān)注。在此,我們在大腸桿菌 BL21（DE3）中共同表達(dá)cscB,cscA,cscK,ino1,miox,udh 和suhB7個基因,分別是蔗糖關(guān)鍵基因和代謝目的產(chǎn)物的關(guān)鍵基因。從功能上構(gòu)建從蔗糖到D-葡萄糖二酸的途徑,該途徑目前還未經(jīng)報導(dǎo)。之后運(yùn)用 Red 重組和 Crispr/Cas9 技術(shù)進(jìn)一步敲除 zwf,pgi,ptsG,uxaC,gudD等5個代謝路徑關(guān)鍵基因,并且過表達(dá)基因glk,彌補(bǔ)D-葡萄糖磷酸化缺失路徑,以及使用D-果糖依賴性的翻譯控制系統(tǒng)用于調(diào)控基因pgi,測定不同時期Pgi的酶活,以達(dá)到調(diào)控碳通量的目的。以上方式最終使得重組大腸桿菌既可使用蔗糖作為唯一碳源,同時可獲得較高的產(chǎn)量。在發(fā)酵過程中,發(fā)現(xiàn),D-葡萄糖二... 

【文章來源】：北京化工大學(xué)北京市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：99 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

本章所構(gòu)建的蔗糖代謝途徑

?ＯＨ??＼＼＾８ｌｔｉｃａｎｃａｃｌｄ?Ｄ－ｇｌ？ｃｕｒｏｎｉｃ＾ｄ＾??圖２－２本章所構(gòu)建的Ｄ－葡萄糖二酸合成途徑??Ｆｉｇ?２－２．?Ｔｈｅ?ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ?ｐａｔｈｗａｙｓ?ｏｆ?Ｄ－ｇｌｕｃａｒｉｃ?ａｃｉｄ?ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ?ｉｎ?ｔｈｉｓ?ｃｈａｐｔｅｒ??將上述的兩條路徑合并之后得到既能利用蔗糖又能合成Ｄ－葡萄糖二酸的代謝工??程菌，蔗糖通過蔗糖通透酶即目的蛋白ＣｓｃＢ進(jìn)入胞內(nèi)，由ＣｓｃＡ分解為Ｄ－果糖和Ｄ－??葡萄糖，Ｄ－果糖路徑負(fù)責(zé)供給細(xì)胞自身的生長，Ｄ－葡萄糖路徑進(jìn)入合成目的產(chǎn)物Ｄ－??葡萄糖二酸的代謝路徑，最終得到目的產(chǎn)物，如圖２－３所示。??Ｓｕｃｒｏｓｅ??？７）＇〇－ｉｎｏｓｉｔｏｌ－ｌ－ｐｈｏｓｐｌｉ＾＾ｋ??／?Ｄ－ｆｒｕｃｔｏｓｅ＾＆Ａ?ｓｕｃｒｏｓｅ?Ｃ以?Ｄ－ｇｌｕｃｏｓｅ?／?ｌ，；〇?ｊ?＼??ＡＴＰ＇Ｊ?Ａ?／?，?，?ｉＳｕｈＢ??ＣｓｃＫ?ｊＧＩｋ?／／ｉ?ｖｏ－ｉｎｏｓｉｔｏｌ??ｔ?？?ＡＤＰ＾?Ｚ?６２?＼??ｆｒｕｃｔｏｓｅ－６－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ＞＞?ｇｌｕｃｏｓｅ－６－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ?Ｍｉｏｘ??ｉ?］ｒ?，ｆＺｗｆ?＾＞Ｃ．－?－Ｄ－ｇｆｕｃｕｒｏｎｉｃ?ａｃｉｄ?ｊ??ｆｍｃｔｏｓｅ－ｌ，６－ｂｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ?６－ｐｈｏｓｐｈｏ－ｇｌｕｃｏｎｏ－１，５－ｌａｃｔｏｎｅ?（?ｎａｉｔ、??Ｄ－ｆｍｃｔｕｒｏｎａｔｅ?Ｕｄｈ??．?ＮＡｔ）Ｈ

?北京化工大學(xué)碩士學(xué)位論文???２．４實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論??２．４．１基因克隆與質(zhì)粒構(gòu)建??（１）目的基因擴(kuò)增??ＰＣＲ擴(kuò)增后得到的蔗糖利用系統(tǒng)的目的基因ｃｗＳ，ａｃＣ?ａｖｃｄ的電泳圖如圖２－３??所示。??ＭａｒｋｅｒＭａｒｋｅｒ?Ｍａｒｋｅｒ??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]代謝工程改造釀酒酵母生產(chǎn)葡萄糖二酸[D]. 鞏旭.江南大學(xué) 2018
[2]重組畢赤酵母催化肌醇合成葡萄糖二酸[D]. 劉葉.江南大學(xué) 2016
[3]水溶液中葡萄糖二酸的吸附機(jī)理研究[D]. 丁潤慧.遼寧大學(xué) 2016
[4]紅茶菌發(fā)酵液的活性成分分析及活性研究[D]. 丁艷如.河南大學(xué) 2016
[5]建立葡萄糖二酸及其1,4內(nèi)酯檢測新方法及其抗炎作用的代謝組學(xué)初步研究[D]. 張寧寧.南昌大學(xué) 2014



本文編號：3099884