木葡聚糖酶作為來源廣泛的一類水解酶不僅能在植物生長過程作為細(xì)胞壁的支撐材料調(diào)控植物生長,同時可以水解半纖維素原料應(yīng)用于生物能源乙醇的生產(chǎn)、在食品行業(yè)中作為添加劑增加產(chǎn)品的粘稠度、啤酒發(fā)酵等行業(yè)降解發(fā)酵產(chǎn)生的木葡聚糖、飼料生產(chǎn)中降解原料中的半纖維素,降低生產(chǎn)成本等。但目前對其研究主要集中在產(chǎn)酶菌株的篩選和結(jié)構(gòu)的研究,對耐熱耐酸性能的木葡聚糖酶鮮有報道,因此對木葡聚糖酶進(jìn)行研究具有重要的應(yīng)用價值和意義。本研究成功構(gòu)建了三個重組木葡聚糖酶的表達(dá)載體,并在大腸桿菌中進(jìn)行了表達(dá)與純化,測定了重組酶的相關(guān)酶學(xué)性質(zhì),主要結(jié)果如下:微生物Caldicellulosiruptor kronotskyensi生長于極熱環(huán)境下,它能夠產(chǎn)生多種耐熱的半纖維素酶,將該微生物產(chǎn)生的木葡聚糖酶基因ckxgl74A成功構(gòu)建至p ET-28a載體后克隆到大腸桿菌DH5α中,然后導(dǎo)進(jìn)大腸桿菌BL21（DE3）中,表達(dá)出83.7 k Da大小的蛋白,與目的蛋白預(yù)期大小一致,該重組酶的最適反應(yīng)溫度為80℃,最適反應(yīng)p H 5.5,該酶在50-70℃下保溫1 h能保持60%的酶活。在p H 5.5的條件下保溫2 h能保持80%... 

【文章來源】：淮陰工學(xué)院江蘇省

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 半纖維素概述
        1.1.1 半纖維素簡介
        1.1.2 半纖維素水解與應(yīng)用
    1.2 木葡聚糖酶概述
        1.2.1 木葡聚糖酶簡介
        1.2.2 木葡聚糖酶研究現(xiàn)狀
        1.2.3 木葡聚糖酶應(yīng)用
    1.3 碳水化合物結(jié)合模塊（CBM）概述
        1.3.1 CBM簡介
        1.3.2 CBM應(yīng)用與研究進(jìn)展
    1.4 選題背景和研究意義
    1.5 研究內(nèi)容
第二章 重組木葡聚糖酶CkXgl74A表達(dá)純化及酶學(xué)性質(zhì)測定
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 菌株與試劑
        2.2.2 實驗儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 序列分析
        2.3.2 構(gòu)建原核表達(dá)載體
        2.3.3 重組木葡聚糖酶CkXgl74A表達(dá)與純化
        2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制
        2.3.5 酶學(xué)性質(zhì)測定
        2.3.6 酶促動力學(xué)參數(shù)研究
        2.3.7 底物特異性研究
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 實驗結(jié)果
        2.4.2 結(jié)論與分析
第三章 重組木葡聚糖酶中CBM模塊差異的研究
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
    3.3 實驗方法
        3.3.1 重組表達(dá)載體構(gòu)建
        3.3.2 表達(dá)與純化
        3.3.3 酶學(xué)性質(zhì)測定
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 實驗結(jié)果
        3.4.2 結(jié)論與分析
第四章 結(jié)論與展望
    4.1 結(jié)論
    4.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3057807