以修飾的非天然核苷作為主體結(jié)構(gòu)所衍生出來(lái)的核苷類(lèi)藥物已經(jīng)在抗病毒、抗腫瘤治療中發(fā)揮著積極的作用。但是,由于正常生命體需要的天然核苷與非天然核苷結(jié)構(gòu)相似,從而導(dǎo)致DNA聚合酶的選擇性松懈可能會(huì)將修飾核苷引入到正常DNA鏈中,進(jìn)而造成體內(nèi)正常DNA的化學(xué)損傷。非天然核苷酸及其衍生物的摻入可能會(huì)引起的基因變異,甚至?xí)绊懟蛲耆璧K正常核酸的生物功能,引起生物體系統(tǒng)紊亂的毒副作用。本論文旨在從核苷的化學(xué)和立體修飾角度,深入研究一種核苷藥物分子（異核苷）摻入DNA鏈之后,異核苷在體內(nèi)的代謝及毒副作用。本論文還研究了生物體內(nèi)各種聚合酶對(duì)藥理活性明確或具有潛在活性的異核苷的識(shí)別能力;在此基礎(chǔ)上,本論文進(jìn)一步深入研究了異核苷損傷的核酸在這些酶的作用下是如何進(jìn)行復(fù)制的。特別地,研究了異核苷類(lèi)藥物分子置于核酸鏈中后,其在正常細(xì)胞的復(fù)制過(guò)程中的跨損傷修復(fù)或變異。目前B家族DNA聚合酶可以識(shí)別D-異核苷三磷酸結(jié)構(gòu),而L-核苷損傷的DNA在體外B家族DNA聚合酶的作用下,具有很強(qiáng)的自我修復(fù)能力。為了研究在不同家族DNA聚合酶的指導(dǎo)下,異核苷損傷的核酸的復(fù)制和跨損傷修復(fù)能力。本論文通過(guò)酶聚合反應(yīng)動(dòng)力學(xué)分析和保真度... 

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圖１．１三種Ｌ－核苷類(lèi)抗病毒藥物??Ｆｉｇｕｒｅ?１．１?Ｔｈｒｅｅ?Ｌ－ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ?ａｎｔｉｖｉｒａｌ?ｄｒｕｇｓ??

?替比夫定?克立夫定??圖１．１三種Ｌ－核苷類(lèi)抗病毒藥物??Ｆｉｇｕｒｅ?１．１?Ｔｈｒｅｅ?Ｌ－ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ?ａｎｔｉｖｉｒａｌ?ｄｒｕｇｓ??１．１．２異核苷??異核苷（圖１．２）?（Ｉｓｏｎｕｃｌｅｉｃ?ａｃｉｄ，?ｉｓｏ）是一類(lèi)堿基由糖基的１’位移至其它位??置的核苷。由于堿基位置的位移，原來(lái)的半縮醛式糖苷鍵缺失，使得異核苷比正??常核苷或者脫氧核苷都要穩(wěn)定。與天然核苷相似，由于糖基鏈接結(jié)構(gòu)及對(duì)映體的??不同，異核苷又可分為Ｄ－／Ｌ－異核苷兩種對(duì)映體構(gòu)型。其中Ｄ－異核苷構(gòu)型與天然??Ｄ－核苷類(lèi)型相同，Ｌ－異核苷構(gòu)型則與Ｌ－核苷構(gòu)型類(lèi)似。??２??

根據(jù)堿基配對(duì)原理，堿基之間的配對(duì)識(shí)別是根據(jù)堿基上的－ＯＨ２和－ＮＨ２之間??的氫鍵的相互作用來(lái)實(shí)現(xiàn)的。據(jù)此可對(duì)堿基進(jìn)行位點(diǎn)修飾，如５－位修飾的２’脫氧??尿苷等。通過(guò)堿基位點(diǎn)的修飾（圖１．３），可以增加寡核苷酸鏈的解鏈溫度，從??而提高寡核苷酸的穩(wěn)定性，進(jìn)而提高對(duì)非互補(bǔ)核酸鏈的識(shí)別能力。??ｎｈ２?Ｘ?Ｔ２??ｈｏ．?Ｎ?Ｎ?ｎｈ２?ｈ?１?ｎ?ｎｈ２?ｈ??＼ｙ?＼°ｙ??ＯＨ?ＯＨ?〇Ｈ??２－龍苷?６－位獅嘌呤猶?５－位娜的苷??圖１．３堿基位點(diǎn)修飾??Ｆｉｇｕｒｅ?１．３?ｂａｓｅ?ｓｉｔｅ?ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ??研宄人員一直在努力開(kāi)發(fā)新的人工堿基對(duì)（非天然堿基對(duì)）用于完善堿基數(shù)??據(jù)庫(kù)。２０００年，ＨｉｒａｏＰｌ結(jié)合了非標(biāo)準(zhǔn)氫鍵模式和形狀－互補(bǔ)性?xún)蓚�(gè)概念，在２－氨??基－６－二甲基氨基嘌呤和吡啶－２－酮之間，開(kāi)發(fā)了屬于他們的第一個(gè)非天然堿基對(duì)。??經(jīng)過(guò)不斷地改進(jìn)，最終得到具有優(yōu)異摻入效率的疏水Ｄｓ－Ｐｘ堿基對(duì)。疏水性Ｄｓ－??Ｐｘ堿基對(duì)通過(guò)連續(xù)改進(jìn)過(guò)程從兩個(gè)初始?jí)A基對(duì)：氫鍵ｘ－ｙ和疏水Ｑ－?Ｐａ對(duì)產(chǎn)生??（圖１．４ａ）。在沒(méi)有任何改性三磷酸的情況下，Ｄｓ－Ｐｘ堿基對(duì)在ＰＣＲ中表現(xiàn)出高??效率的識(shí)別能力和保真度。最近，Ｈｉｍ〇ｔ２５Ｈ正實(shí)了?Ｄｓ－Ｐｘ堿基對(duì)可以在１００個(gè)ＰＣＲ??循環(huán)中存活，并且在１００個(gè)循環(huán)ＰＣＲ后，超過(guò)９７％的ＤＮＡ中Ｄｓ－Ｐｘ堿基對(duì)保??留在１０２８倍擴(kuò)增產(chǎn)物中。??１９９９年


本文編號(hào)：3029269