β-1,3-1,4-葡聚糖酶是食品、飼料等輕工業(yè)行業(yè)中重要的糖苷水解酶之一,其廣泛應(yīng)用于啤酒糖化、寡糖制備等過程,并且也是常用的飼料添加劑。由于具有重要應(yīng)用價(jià)值,目前針對(duì)β-1,3-1,4-葡聚糖酶開發(fā)的研究越來越受到重視。因此,基于前期研究結(jié)果,本研究對(duì)泡盛曲霉CAU33中的β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因AaBglu12A進(jìn)行了表達(dá)、性質(zhì)和應(yīng)用研究,獲得以下主要結(jié)論:1.從泡盛曲霉CAU33克隆獲得β-1,3-1,4葡聚糖酶基因AaBglu12A,該基因編碼239個(gè)氨基酸,編碼區(qū)含有兩個(gè)內(nèi)含子,長度分別為48 bp和66 bp;預(yù)測(cè)AaBglu12A編碼的成熟蛋白分子量為24.17 kDa,等電點(diǎn)為4.63;通過氨基酸序列比對(duì)推測(cè)AaBglu12A為新型GH 12家族β-1,3-1,4-葡聚糖酶;在畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)中成功表達(dá)AaBglu12A,通過高拷貝篩選獲得具有高β-1,3-1,4-葡聚糖酶產(chǎn)酶活性的克隆,并且在5-L發(fā)酵罐中進(jìn)行高密度發(fā)酵,其發(fā)酵上清液酶活力達(dá)到159500 U/mL,蛋白質(zhì)含量達(dá)到31.7 mg/mL,菌體濕重達(dá)到404 g/L,達(dá)到了較高的β-1,3-1,... 

【文章來源】：河南科技大學(xué)河南省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 β-葡聚糖
    1.2 β-葡聚糖酶
    1.3 β-1,3-1,4-葡聚糖酶
        1.3.1 β-1,3-1,4-葡聚糖酶的來源
        1.3.2 β-1,3-1,4-葡聚糖酶的酶學(xué)性質(zhì)
        1.3.3 β-1,3-1,4-葡聚糖酶的異源表達(dá)
    1.4 β-1,3-1,4-葡聚糖酶的應(yīng)用
        1.4.1 β-1,3-1,4-葡聚糖酶在啤酒釀造中的應(yīng)用
        1.4.2 β-1,3-1,4-葡聚糖酶在葡寡糖制備中的應(yīng)用
        1.4.3 β-1,3-1,4-葡聚糖酶在飼料工業(yè)中的應(yīng)用
    1.5 本課題的立題意義與目的
第2章 泡盛曲霉β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因AaBglu12A的表達(dá)
    2.1 試驗(yàn)材料與儀器
        2.1.1 菌株及載體
        2.1.2 主要試驗(yàn)材料
        2.1.3 培養(yǎng)基
        2.1.4 主要試驗(yàn)儀器
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 泡盛曲霉CAU33 基因組DNA的提取
        2.2.2 泡盛曲霉CAU33總RNA的提取
        2.2.3 cDNA第一鏈的合成
        2.2.4 β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因AaBglu12A的 PCR擴(kuò)增與序列分析
        2.2.5 β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因AaBglu12A與表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.6 β-1,3-1,4 葡聚糖酶基因AaBglu12A的異源表達(dá)及轉(zhuǎn)化子篩選
        2.2.7 高拷貝轉(zhuǎn)化子篩選
        2.2.8 重組β-1,3-1,4-葡聚糖酶AaBglu12A在畢赤酵母中的高密度發(fā)酵
        2.2.9 β-1,3-1,4 葡聚糖酶AaBglu12A的酶活力測(cè)定
        2.2.10 β-1,3-1,4 葡聚糖酶AaBglu12A的蛋白質(zhì)含量測(cè)定
        2.2.11 β-1,3-1,4 葡聚糖酶AaBglu12A的 SDS-PAGE分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因AaBglu12A的 PCR擴(kuò)增與序列分析
        2.3.2 β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因AaBglu12A在畢赤酵母中的表達(dá)
        2.3.3 重組β-1,3-1,4-葡聚糖酶AaBglu12A在畢赤酵母中的高密度發(fā)酵
    2.4 本章小結(jié)
第3章 泡盛曲霉β-1,3-1,4-葡聚糖酶AaBglu12A的酶學(xué)性質(zhì)研究..
    3.1 試驗(yàn)材料與儀器
        3.1.1 主要試驗(yàn)材料
        3.1.2 主要試驗(yàn)儀器
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 β-1,3-1,4 葡聚糖酶AaBglu12A的純化
        3.2.2 β-1,3-1,4 葡聚糖酶AaBglu12A的酶活力測(cè)定
        3.2.3 β-1,3-1,4 葡聚糖酶AaBglu12A的蛋白質(zhì)含量測(cè)定
        3.2.4 β-1,3-1,4 葡聚糖酶AaBglu12A的 SDS-PAGE分析
        3.2.5 β-1,3-1,4 葡聚糖酶AaBglu12A的分子量測(cè)定
        3.2.6 β-1,3-1,4-葡聚糖酶AaBglu12A的最適pH和 pH穩(wěn)定性
        3.2.7 β-1,3-1,4-葡聚糖酶AaBglu12A的最適溫度,溫度穩(wěn)定性和半衰期
        3.2.8 β-1,3-1,4-葡聚糖酶AaBglu12A的底物特異性
        3.2.9 β-1,3-1,4-葡聚糖酶AaBglu12A的水解特性
        3.2.10 金屬離子及化合物對(duì)β-1,3-1,4-葡聚糖酶AaBglu12A活力的影響
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 β-1,3-1,4-葡聚糖酶AaBglu12A的純化
        3.3.2 β-1,3-1,4-葡聚糖酶AaBglu12A的分子量測(cè)定
        3.3.3 β-1,3-1,4-葡聚糖酶AaBglu12A的酶學(xué)性質(zhì)
        3.3.4 β-1,3-1,4-葡聚糖酶AaBglu12A的底物特異性
        3.3.5 β-1,3-1,4-葡聚糖酶AaBglu12A的水解特性
        3.3.6 金屬離子及化合物對(duì)β-1,3-1,4-葡聚糖酶AaBglu12A酶活力的影響
    3.4 本章小結(jié)
第4章 泡盛曲霉β-1,3-1,4-葡聚糖酶AaBglu12A的應(yīng)用研究
    4.1 試驗(yàn)材料與儀器
        4.1.1 主要試驗(yàn)材料
        4.1.2 主要試驗(yàn)儀器
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 β-1,3-1,4-葡聚糖酶AaBglu12A在麥芽糖化中的應(yīng)用
        4.2.2 β-1,3-1,4-葡聚糖酶AaBglu12A酶解燕麥麩皮制備葡寡糖的應(yīng)用
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 β-1,3-1,4-葡聚糖酶AaBglu12A在麥芽糖化中的應(yīng)用
        4.3.2 β-1,3-1,4-葡聚糖酶AaBglu12A酶解燕麥麩皮制備葡寡糖的應(yīng)用
    4.4 本章小結(jié)
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 論文創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 展望
參考文獻(xiàn)
縮略語詞匯表
致謝
攻讀學(xué)位期間的研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]泡盛曲霉CAU33固體發(fā)酵產(chǎn)β-1,3-1,4-葡聚糖酶發(fā)酵條件優(yōu)化[J]. 劉二偉,劉學(xué)強(qiáng),楊紹青,江正強(qiáng).  生物產(chǎn)業(yè)技術(shù). 2018(03)
[2]β-1,3-1,4-葡聚糖酶研究進(jìn)展[J]. 夏許寒,朱成林,李誠.  食品科學(xué). 2016(19)
[3]日糧中小麥用量及添加重組葡聚糖酶和木聚糖酶對(duì)肉仔雞生長、屠宰性能和腸道發(fā)育的影響[J]. 郭學(xué)義,張慧玲,楊玉霞,汪艷,樊曉凌,袁姣姣,陳勇.  中國家禽. 2015(05)
[4]海洋細(xì)菌Bacillus mojavensis 1A00437 β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因的克隆、表達(dá)及功能研究[J]. 左懷雨,王茂淋,邵宗澤,李光玉,徐柳,喻子牛,張吉斌.  化學(xué)與生物工程. 2014(09)
[5]產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌1,3-1,4-β-葡聚糖酶基因在畢赤酵母中的表達(dá)[J]. 楊玉霞,張慧玲,汪艷,陳勇.  南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2014(04)

碩士論文
[1]泡盛曲霉β-1,3-1,4-葡聚糖酶的發(fā)酵條件優(yōu)化、純化、性質(zhì)及應(yīng)用研究[D]. 劉二偉.河南科技大學(xué) 2017



本文編號(hào)：2941710