本文為了提高扇貝裙邊的高值化利用,通過(guò)蛋白酶酶解扇貝裙邊工藝的優(yōu)化,再對(duì)酶解物分離純化獲得ACE抑制肽的結(jié)構(gòu),并通過(guò)高血壓動(dòng)物模型試驗(yàn),驗(yàn)證酶解物的降血壓效果。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:1.以扇貝裙邊為原料,探究了胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶及堿性蛋白酶酶解產(chǎn)物的ACE抑制活性,其中木瓜蛋白酶的酶解產(chǎn)物ACE抑制率最高,為71.25%;根據(jù)單因素和正交試驗(yàn)結(jié)果,確定木瓜蛋白酶酶解扇貝裙邊最佳酶解工藝條件為料液比(g/mL)1:3,加酶量2.0%,酶解溫度60℃,酶解時(shí)間1 h,pH 7.0。2.扇貝裙邊酶解物冷凍干燥后,經(jīng)Sephadex LH-20層析柱分離得到七個(gè)組分峰,其中F5、F6、F7具有ACE抑制活性,進(jìn)而通過(guò)RP-HPLC(20%乙腈)洗脫后,得到F5-3、F7-2、F7-4具有ACE抑制活性;再次通過(guò)RP-HPLC(10%乙腈)進(jìn)一步純化后,確定F5-3-3、F7-4-3具有ACE抑制活性,而F7-2洗脫出的八個(gè)信號(hào)組分均具有ACE抑制活性;最后對(duì)F5-3-3進(jìn)行質(zhì)譜鑒定,獲得ACE抑制肽的序列為Val-Trp(VW),分子量303.17 Da,通過(guò)合成后測(cè)定其IC_(50)為86.9μmol/L。3.對(duì)扇貝裙邊來(lái)源的ACE抑制肽進(jìn)行降血壓活性測(cè)定。通過(guò)超濾膜將扇貝裙邊酶解液截留成不同分子量范圍的樣品,其中分子量范圍為3 KDa~1 KDa酶解產(chǎn)物的ACE抑制活性更高,其IC_(50)值為0.88 mg/mL,將該部分活性肽以灌胃方式給藥SHR大鼠,通過(guò)尾套法測(cè)定SBP,結(jié)果顯示,活性肽可顯著降低SHR的SBP,在給藥9天(172±7 mmHg)后,同空白對(duì)照組的SBP相比一直表現(xiàn)出極顯著性差異(P0.01),在第28天時(shí)其SBP降低到161±3 mmHg,但SHR的SBP高于陽(yáng)性對(duì)照組;在停藥后第7天酶解物組SHR的血壓為169±5 mmHg,同空白對(duì)照組的SBP相比仍都表現(xiàn)出了極顯著性差異(P0.01);同時(shí)扇貝裙邊活性肽對(duì)SHR大鼠的體重增長(zhǎng)也有一定的促進(jìn)作用。第28天停藥后,對(duì)SHR血清中ACE,AngⅡ,ATG,ALD進(jìn)行測(cè)定,發(fā)現(xiàn)ACE,AngⅡ,ATG活性及ALD的含量低于空白對(duì)照組;而相對(duì)于陽(yáng)性對(duì)照組,酶解物組SHR血清中ACE,AngⅡ,ATG的表達(dá)水平略高,但ALD的表達(dá)水平相對(duì)降低。
【學(xué)位單位】：大連海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：TQ936.16
【文章目錄】：
縮寫詞
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 扇貝
        1.1.1 扇貝簡(jiǎn)介
        1.1.2 扇貝裙邊的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值
        1.1.3 扇貝裙邊的加工利用現(xiàn)狀
    1.2 生物活性肽
        1.2.1 生物活性肽的概念
        1.2.2 貝類蛋白源生物活性肽的研究現(xiàn)狀
    1.3 高血壓與ACE抑制劑
        1.3.1 ACE抑制肽降壓機(jī)制
        1.3.2 ACE抑制肽的提取方法
        1.3.3 ACE抑制肽的分離純化
        1.3.4 ACE抑制肽的結(jié)構(gòu)鑒定
        1.3.5 ACE抑制肽的活性評(píng)估
        1.3.6 ACE抑制肽的構(gòu)效關(guān)系
    1.4 本課題的研究目的與意義
    1.5 本課題的主要研究?jī)?nèi)容
第二章 扇貝裙邊ACE抑制肽的酶解工藝優(yōu)化
    2.1 材料與試劑
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)原料
        2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
    2.2 主要儀器設(shè)備
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 ACE抑制活性的測(cè)定
        2.3.2 基本成分測(cè)定
        2.3.3 脫鹽工藝
        2.3.4 蛋白酶的篩選
        2.3.5 單因素試驗(yàn)
        2.3.6 正交試驗(yàn)
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 基本成分分析
        2.4.2 脫鹽工藝
        2.4.3 蛋白酶的篩選
        2.4.4 單因素試驗(yàn)
        2.4.5 正交試驗(yàn)
        2.4.6 驗(yàn)證試驗(yàn)
第三章 扇貝裙邊ACE抑制肽的分離純化
    3.1 材料與試劑
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
    3.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 扇貝裙邊酶解產(chǎn)物的制備
        3.3.2 SephadexLH-20層析柱對(duì)酶解產(chǎn)物的分離
        3.3.3 反高效液相（RP-HPLC）對(duì)活性組分的純化
        3.3.4 ACE抑制肽氨基酸殘基序列的鑒定
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 SephadexLH-20層析柱對(duì)酶解產(chǎn)物的分離
        3.4.2 RP-HPLC對(duì)活性組分的純化
        3.4.3 ACE抑制肽氨基酸殘基序列的分析
第四章 扇貝裙邊ACE抑制肽降血壓活性研究
    4.1 材料與試劑
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
    4.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 樣品制備
        4.3.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組
        4.3.3 心臟收縮血壓測(cè)定方法
        4.3.4 SHR血清中RAS系統(tǒng)中相關(guān)成分測(cè)定
        4.3.5 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 灌喂樣品的IC50值
        4.4.2 SHR體重的變化情況
        4.4.3 SHR的SBP變化情況
        4.4.4 SHR血清中RAS系統(tǒng)中相關(guān)指標(biāo)的影響
第五章 結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 何榮海;馬海樂(lè);余筱潔;;條斑紫菜ACEI抑制肽的超濾分離與離子交換純化![J];農(nóng)業(yè)機(jī)械學(xué)報(bào);2012年02期

2 段秀;張玉鋒;莊永亮;;食源性血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽研究進(jìn)展[J];食品工業(yè)科技;2012年20期

3 管驍;彭劍秋;金周筠;沈宇;;食源性血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽的研究進(jìn)展[J];食品與發(fā)酵工業(yè);2011年07期

4 于一丁;于志鵬;趙文竹;劉靜波;;血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽穩(wěn)定性研究[J];食品工業(yè)科技;2010年01期

5 魯軍;任迪峰;王建中;TANOKURA Masaru;;螺旋藻源血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽的純化和鑒定[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2010年05期

6 李勇湧;黃文祥;朱衛(wèi)民;李崇智;張德梅;;β-內(nèi)酰胺酶抑制肽的活性研究[J];中國(guó)抗生素雜志;2010年04期

7 夏樹(shù)華;王璋;;反相高效液相色譜/基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜分離鑒定螺螄血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制肽[J];色譜;2007年01期

8 安桂香;莊桂東;徐振凱;姚明經(jīng);遲玉森;;食物中血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽的研究進(jìn)展[J];食品研究與開(kāi)發(fā);2006年06期

9 徐榕榕,陶冠軍,李進(jìn)偉,楊嚴(yán)俊;高效液相色譜測(cè)定血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制肽的活性[J];河南工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2005年04期

10 何海倫,陳秀蘭,孫彩云,張玉忠;血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽的研究進(jìn)展[J];中國(guó)生物工程雜志;2004年09期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 羅鵬;葵花籽ACE抑制肽的分離純化、結(jié)構(gòu)分析與穩(wěn)態(tài)化研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

2 周紅麗;南瓜籽蛋白血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽的研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

3 黎觀紅;食物蛋白源血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽的研究[D];江南大學(xué);2005年

4 李云;乳源酵母發(fā)酵牛乳產(chǎn)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制肽的研究[D];浙江大學(xué);2015年

5 鄭亞軍;油棕粕谷蛋白-2血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽制備與降血壓活性研究[D];陜西師范大學(xué);2016年

6 舒國(guó)偉;羊乳源ACE抑制肽制備、分離純化及鑒定[D];陜西科技大學(xué);2016年

7 趙元暉;海地瓜蛋白水解物中ACE抑制肽的分離純化及合成[D];中國(guó)海洋大學(xué);2009年

8 翟愛(ài)華;高活性米糠蛋白ACE抑制肽的制備及降血壓效果研究[D];沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

9 張艷萍;貽貝蛋白中ACE抑制肽的制備及其構(gòu)效關(guān)系研究[D];浙江工商大學(xué);2011年

10 張穎;牛、羊乳酪蛋白源DPP-Ⅳ抑制肽的制備、鑒定及抑制機(jī)理研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 吳迪;醋蛋中ACE抑制肽的酶法制備、分離純化及其活性保護(hù)[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

2 鄒基豪;綠豆ACE抑制肽的純化及功能特性研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

3 李晶晶;扇貝裙邊ACE抑制肽的分離純化及活性研究[D];大連海洋大學(xué);2018年

4 顏澤;牡蠣（Ostrea tailienwhanensis）ACE抑制肽的制備技術(shù)的研究[D];大連海洋大學(xué);2018年

5 柯麗娟;鮑魚(yú)內(nèi)臟膠原ACE抑制肽的分離純化及其理化性質(zhì)的研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2015年

6 孫美玲;基于親和色譜的皮氏蛾螺ACE抑制肽分離及其特性評(píng)價(jià)[D];大連工業(yè)大學(xué);2017年

7 熊珍愛(ài);血管緊張素轉(zhuǎn)換酶的提取與其抑制劑相互作用研究[D];廣西大學(xué);2018年

8 吳楠;徳氏乳桿菌QS306發(fā)酵乳產(chǎn)ACE抑制肽的特性研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

9 許偉瀚;Lb.plantarum QS670產(chǎn)ACE抑制肽及其合成體的理化特性研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

10 王曉丹;ACE抑制肽YS和INN的構(gòu)效關(guān)系研究[D];天津商業(yè)大學(xué);2018年

本文編號(hào)：2880768