根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)是山東省設(shè)施蔬菜中普遍存在的一種植物寄生性線(xiàn)蟲(chóng),每年都會(huì)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失,成為制約設(shè)施蔬菜發(fā)展的重要因素�；瘜W(xué)農(nóng)藥的使用造成環(huán)境污染和生態(tài)破壞,同時(shí)也對(duì)蔬菜作物的品質(zhì)有很大的影響,生物防治受到人們的關(guān)注。本研究對(duì)山東省部分設(shè)施蔬菜進(jìn)行樣品采集,鑒定根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)的種類(lèi),并以此為依據(jù)探究生防菌株AMCC1001028對(duì)南方根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)的生防試驗(yàn)和生防菌株發(fā)酵工藝條件的初步優(yōu)化。主要獲得以下結(jié)果:(1)對(duì)山東德州、濟(jì)南、濰坊和臨沂四個(gè)地區(qū)的七個(gè)地點(diǎn)進(jìn)行采樣,檢測(cè)土樣中的蟲(chóng)口密度和線(xiàn)蟲(chóng)的種類(lèi)。結(jié)果表明,樣品中根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)種群密度最高的為96.2 ind·g~(-1)soil。利用SCAR-PCR檢測(cè)四種常見(jiàn)根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng),能夠檢測(cè)到南方根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)、花生根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)和北方根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng),其中單獨(dú)侵染樣品有6份,復(fù)合侵染樣品有1份,南方根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)為優(yōu)勢(shì)種群。(2)生防菌株AMCC1001028發(fā)酵上清液對(duì)南方根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)的二齡幼蟲(chóng)的致死試驗(yàn)結(jié)果表明,該菌株培養(yǎng)48h發(fā)酵上清液處理二齡幼蟲(chóng)12h和24h的校正致死率分別為87.22%和100%,并且經(jīng)過(guò)酸堿處理和冷熱處理依然有很高的殺線(xiàn)蟲(chóng)活性。生防菌AMCC1001028的盆栽試驗(yàn)表明,使用該生防菌處理50d番茄的根結(jié)數(shù)和卵囊數(shù)分別降低了28.81%和50.85%。說(shuō)明該生防菌有防治根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)的生防潛力,具有一定的開(kāi)發(fā)前景。(3)生防菌株AMCC1001028的發(fā)酵條件優(yōu)化。通過(guò)對(duì)十種現(xiàn)有的基礎(chǔ)培養(yǎng)基進(jìn)行篩選,確定了一組菌體量和芽孢數(shù)最高的培養(yǎng)基作為發(fā)酵優(yōu)化的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。對(duì)搖瓶培養(yǎng)條件進(jìn)行單因素試驗(yàn),確定了最佳培養(yǎng)溫度為37℃,最佳裝液量為10%,最佳接種量為4%,最佳初始pH為7.0。通過(guò)單因素試驗(yàn)驗(yàn)證了發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基中玉米粉為最佳碳源,發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基中豆餅粉為最佳氮源。通過(guò)進(jìn)行Plackett-Burman試驗(yàn)篩選出對(duì)菌體量有顯著影響的因素為玉米粉、豆餅粉和碳酸鈣。利用Box-Behnken中心組合設(shè)計(jì)對(duì)三個(gè)顯著因素進(jìn)行優(yōu)化,確定了三者的最優(yōu)點(diǎn)為X_1=2.94,X_2=2.46,X_3=0.18。優(yōu)化后的發(fā)酵培養(yǎng)基為玉米粉29.4g/L,豆餅粉24.6g/L,碳酸鈣1.82 g/L,硫酸銨1.0g/L,硫酸鎂0.1g/L,磷酸二氫鉀2.1g/L,硫酸錳0.5g/L。利用優(yōu)化培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵,檢測(cè)發(fā)酵液菌體量為1.50×10~(10)CFU/mL,比發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基提高了30.43%。
【學(xué)位單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：S476;S436.3;TQ920.6
【部分圖文】：

鑒定方法是形態(tài)學(xué)特征鑒定。鑒定四種最常見(jiàn)根紋、雌蟲(chóng)的口針、雄蟲(chóng)的頭部和口針以及二齡幼，會(huì)陰花紋比較容易準(zhǔn)備光鏡檢查的切片。表 1-1 四種常見(jiàn)根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)的重要形態(tài)學(xué)特征總結(jié)ary of important diagnostic characters of the four most common Melo弓 側(cè)脊 條紋 ，方形側(cè)脊無(wú)，條紋有裂痕、分叉粗糙，光滑，波浪狀有時(shí)是鋸齒狀，圓形 明顯的側(cè)脊粗糙，光滑，略帶波浪，圓形，近側(cè)方凹痕側(cè)脊無(wú)，條紋短、不規(guī)則、分叉粗糙，光滑，略帶波浪，圓形 側(cè)脊無(wú)細(xì)膩，光滑，略帶波浪

濰坊壽光 黃瓜 15.3 M. incognita M臨沂沂水 甜瓜 23.7 M. incognit臨沂莒南 甜瓜 13.5 M. arenari濟(jì)南濟(jì)陽(yáng) 茄子 29.1 M. incognit濰坊壽光 絲瓜 96.2 M. incognit德州德州 番茄 43.5 M. incognit看出不同蔬菜種植地區(qū)根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)病害嚴(yán)重程度不物病蟲(chóng)害嚴(yán)重程度也不相同，壽光地區(qū)的絲瓜地區(qū)的黃瓜蟲(chóng)口密度為 15.3 ind·g-1soil。R-PCR 鑒定根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)的特異性引物對(duì)山東地區(qū)部分蔬菜大棚 鑒定，并根據(jù)擴(kuò)增條帶確定根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)的種類(lèi)，電泳

圖 3-2 SCAR-PCR 擴(kuò)增結(jié)果（南方根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)和北方根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)Fig. 3-2 SCAR-PCR amplification results (M. ingenita and M. h注：M: DNA Marker DL 2000；1、2 南方根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)；3、4 北方根-PCR 擴(kuò)增條帶的結(jié)果可知，在 7 份樣品中檢測(cè)南方根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)，1 份為花生根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)；復(fù)合侵染線(xiàn)蟲(chóng)混合種群，未檢測(cè)到爪哇根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)。從調(diào)查線(xiàn)蟲(chóng)為主，為下一步試驗(yàn)提供了依據(jù)。CC1001028 生防試驗(yàn)蟲(chóng)的獲取
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