隨著人們對(duì)黃曲霉毒素污染食品安全問題的愈加重視,關(guān)于黃曲霉毒素的防治研究也隨之增多,但是以深海資源為原料制備的黃曲霉毒素抑制劑卻少之又少。本研究以篩選優(yōu)化培養(yǎng)抑制黃曲霉毒素合成的深海細(xì)菌培養(yǎng)基配方與培養(yǎng)條件為目的,并對(duì)優(yōu)化后配方的放大發(fā)酵和可濕性粉劑的工藝進(jìn)行研究。首先對(duì)10種深海細(xì)菌和8種常用培養(yǎng)基進(jìn)行篩選,通過搖瓶發(fā)酵和Tip-culture法對(duì)發(fā)酵結(jié)果進(jìn)行抑菌抑毒性質(zhì)的檢測(cè),結(jié)果發(fā)現(xiàn)ISP2、淀粉酪蛋白和M2培養(yǎng)基培養(yǎng)菌種代謝活性較好,抑制寄生曲霉活性可達(dá)到90%以上,而菌種的代謝會(huì)很大程度受到培養(yǎng)基的影響,因此可以從改變培養(yǎng)基成分配比的方式來提高菌種代謝活性。將淀粉酪蛋白和M2培養(yǎng)基利用DPS均勻設(shè)計(jì)軟件進(jìn)行優(yōu)化得到抑菌率增加方案FA13-M2-N19和成本降低方案FA13-淀粉酪蛋白-PPM2等2種優(yōu)化方案。優(yōu)化后方案進(jìn)行放大培養(yǎng)過程中通過種子液生長(zhǎng)曲線繪制、平板菌落計(jì)數(shù)法等研究對(duì)種子液和消泡劑進(jìn)行篩選,確定以PDM3為種子液培養(yǎng)基,培養(yǎng)18 h為一代接種時(shí)間,12 h為二代接種時(shí)間,并且添加0.01%的C5消泡劑為放大發(fā)酵方案。通過對(duì)優(yōu)化后培養(yǎng)基進(jìn)行抑菌抑毒率的驗(yàn)證結(jié)果表明優(yōu)化后配方比優(yōu)化前配方的抑菌抑毒率高。為了將細(xì)菌發(fā)酵菌液制備成抗植物病原真菌殺菌劑,首先需要將大量液體菌劑經(jīng)噴霧干燥成粉末以便于儲(chǔ)存和運(yùn)輸,因此將FA13-PDM3和FA13-N19發(fā)酵液2種噴干粉進(jìn)抑制寄生曲霉NFRI-95的半抑制濃度IC_(50)的測(cè)定,結(jié)果表明放大樣品噴干粉末IC_(50)均低于對(duì)照雙乙酸鈉藥劑的IC_(50)。后續(xù)通過超濾、醇沉和茚三酮檢測(cè)結(jié)果表明,深海細(xì)菌產(chǎn)抑制黃曲霉毒素合成活性產(chǎn)物主要成分為蛋白質(zhì)類。
【學(xué)位單位】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：TQ920.6
【部分圖文】：

圖 4-1 PDM3 培養(yǎng)一代種子液生長(zhǎng)曲線與菌落變化種子液的傳代時(shí)間后，以 PDM3 培養(yǎng)基制備一代種，震蕩接種至 PPM2、PDM3 和 PHM3 中培養(yǎng) 36 h 進(jìn)行二代種子化如表 4-4，圖 4-2 所示，可以發(fā)現(xiàn) PPM2 培養(yǎng)基中菌種濃PDM3 和 PHM3 的 OD 值經(jīng)一代種的增活后在二代種中指平穩(wěn)期，延滯期縮短，12 h 左右溶液中菌濃度平穩(wěn)且達(dá)到表 4-4 三個(gè)培養(yǎng)基二代接種中 OD600 變化）OD600PPM2 PDM3 0.272 0.366 0.638 1.777

圖 4-2 三種培養(yǎng)基的二代種子液 OD600 變化篩選結(jié)果泡性能測(cè)試結(jié)果泡劑的劑量毒性與抑泡能力，首先進(jìn)行了消泡劑可用，選用了 PHM3 培養(yǎng)基來進(jìn)行發(fā)酵，Tip-culture 法檢測(cè) 4-5，通過初步篩選數(shù)據(jù)可以看出，T8，T9 對(duì) FA13 菌是最小劑量也影響了細(xì)菌正常的代謝，C3 的持續(xù)抑泡生了大量泡沫，而其他消泡劑在持續(xù)抑泡和毒害作用驗(yàn)的。

圖 4-3 6 種消泡劑發(fā)酵進(jìn)程中泡沫變化表 4-5 6 種消泡劑極限劑量下發(fā)酵液原液與 5 倍稀釋液抑菌抑毒率種類抑菌率（%） 抑紅率（%）原液 五倍 原液 五C1min 1.000 0.487±0.0531.0001C1max 0.961±0.066 0.406±0.0831.0001C3min 1.000 0.454±0.2281.0000.96C3max 1.000 0.445±0.1111.0001C5min 1.000 0.673±0.1721.0001C5max 1.000 0.619±0.1081.0001T7min 0.632±0.232 0.043±0.7611.0000.05T7max0.792±0.110 0.431±0.6451.000-0.36T8min0.377±0.160 0.521±0.2351.0001T8max0.247±0.238 0.109±0.3541.0000.91
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本文編號(hào)：2839564