長(zhǎng)期高脂膳食會(huì)誘導(dǎo)機(jī)體脂代謝紊亂和氧化還原狀態(tài)失衡,進(jìn)而產(chǎn)生一系列和脂代謝紊亂相關(guān)的慢性疾病,比如肥胖、心血管疾病、2型糖尿病等。初榨葡萄籽油富含多不飽和脂肪酸、V_E(生育酚和生育三烯酚)、植物甾醇、角鯊烯、多酚等功能活性成分,成為食用植物油研究的最熱點(diǎn)的話(huà)題。研究表明初榨葡萄籽油具有抗氧化、降血脂、抗衰老、抗癌等生理作用,但關(guān)于初榨葡萄籽油對(duì)調(diào)節(jié)生物體內(nèi)的生理功能的作用機(jī)制尚需深入研究。本文旨在控制能量攝入一致的前提下,探究初榨葡萄籽油對(duì)改善高脂膳食小鼠脂代謝調(diào)節(jié)的影響,對(duì)進(jìn)一步加大葡萄籽資源的綜合應(yīng)用具有深遠(yuǎn)的意義。首先,滿(mǎn)足能量攝入保持一致的前提下,將高脂飼料中的油脂全部替換為豬油、玉米油和初榨葡萄籽油,初步探究全替換初榨葡萄籽油對(duì)改善小鼠脂代謝紊亂的影響。36只C57BL/6J雄性小鼠隨機(jī)分成3組:豬油組(Lard組);玉米油組(CO組);初榨葡萄籽油組(GSO組)。飼養(yǎng)期間分別測(cè)定小鼠葡萄糖耐量和胰島素耐量。小鼠處死后,分別取小鼠的血清和肝臟,觀察肝臟切片,測(cè)定小鼠血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C、FFA含量以及肝組織ALT和AST活力。結(jié)果表明:和Lard組相比,GSO組小鼠的最終體重和體重增長(zhǎng)量分別減少了8.3%和18.3%;血清中的TC、TG、LDL-C、FFA含量以及肝臟中的ALT和AST活力均有顯著性的降低(p0.05)。此外,全替換的初榨葡萄籽油可以顯著改善小鼠葡萄糖耐量和胰島素耐量(p0.05)。肝臟形態(tài)學(xué)結(jié)果顯示全替換的初榨葡萄籽油可以顯著地降低肝臟脂肪的沉積,減少脂肪細(xì)胞的大小(p0.05)。其次,能量攝入保持一致的前提下,高脂飼料中的豬油成分保持不變,將植物油脂成分分別替換成豬油、玉米油和初榨葡萄籽油,探究部分替換的初榨葡萄籽油對(duì)改善高脂膳食小鼠脂代謝紊亂的影響。48只五周齡C57BL/6J雄性小鼠隨機(jī)分為4組:正常對(duì)照組(ND組),玉米油組(CO60%組),初榨葡萄籽油組(GSO60%組),豬油組(Lard60%組)。每周檢測(cè)小鼠的體重,飼養(yǎng)期間測(cè)定小鼠葡萄糖耐量、胰島素耐量、空腹血糖以及小鼠的能量代謝狀態(tài)。小鼠處死后,分別取小鼠的血清、脂肪和肝臟,觀察肝臟切片,測(cè)定小鼠血清中的生化指標(biāo),肝臟中的抗氧化指標(biāo),ELISA法測(cè)定小鼠肝臟炎癥因子和脂肪組織中瘦素和脂聯(lián)素指標(biāo),實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)分析小鼠肝臟中的PPAR-α、ACC-1、FAS、SREBP-1c、SCD-1和ACOX-1基因的表達(dá),脂肪組織炎癥因子IL-6、TNF-α和MCP-1基因的表達(dá)。結(jié)果表明:和Lard60%組相比,GSO60%組小鼠的體重以及體重增量分別減少了6.22%和12.97%;呼吸交換率(RER)、能量消耗、自主活動(dòng)量、葡萄糖耐量和胰島素耐量均有顯著性的提高(p0.05);血清中TC、TG、LDL-C、FFA、胰島素、胰高血糖素以及全血中的糖化血紅蛋白水平均有顯著性的降低(p0.05);肝臟中的CAT、SOD、GSH-PX活力顯著性地升高(p0.05),MDA活力顯著性地降低(p0.05);肝臟炎癥因子IL-6和TNF-α水平顯著性地降低(p0.05);脂肪組織中瘦素水平顯著性地降低(p0.05),脂聯(lián)素水平顯著性地升高(p0.05)。肝臟HE染色和油紅O染色結(jié)果表明部分替換的初榨葡萄籽油可以一定程度地改善高脂膳食小鼠肝細(xì)胞損傷,降低肝臟脂肪的沉積,減少脂肪細(xì)胞的大小。RT-qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示部分替換的初榨葡萄籽油可以上調(diào)小鼠肝臟中PPAR-α基因的表達(dá),下調(diào)ACC-1、FAS、SREBP-1c基因以及脂肪組織炎癥因子IL-6、TNF-α和MCP-1基因的表達(dá)。最后,初步探究初榨葡萄籽油的脂肪酸、不皂化物和多酚對(duì)改善高脂飼料小鼠脂代謝紊亂的影響。45只C57BL/6J雄性小鼠隨機(jī)分為5組:豬油組(Lard),精煉葡萄籽油組(GSE),精煉葡萄籽油和不皂化物組(GSE+UN),精煉葡萄籽油和多酚組(GSE+PO),精煉葡萄籽油、不皂化物和多酚組(GSE+UN+PO)。實(shí)驗(yàn)期間測(cè)定小鼠的糖耐量和空腹血糖,小鼠處死后測(cè)定小鼠血清中TC、TG、ALT、AST以及胰島素水平。結(jié)果表明:和Lard組相比,初榨葡萄籽油中的不飽和脂肪酸、不皂化物和多酚功能成分均能有效地改善高脂膳食小鼠的體重,減少肝臟脂肪的堆積,降低小鼠血清TC、TG和胰島素水平。此外,初榨葡萄籽油不皂化物和多酚成分還可以有效地改善小鼠的糖耐量,不皂化物在改善小鼠脂代謝紊亂作用效果要強(qiáng)于多酚。
【學(xué)位單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：TS221
【部分圖文】：

Fig. 2-1 Standard curve of stigmasterol4 角鯊烯測(cè)定照 Nenadis 等[122]方法：稱(chēng)取植物油 0.5 g，經(jīng)硅膠柱處理后，采中的角鯊烯含量。準(zhǔn)確稱(chēng)取 20mg 角鯊烯溶于 100mL 的正己烷儲(chǔ)備液，然后用正己烷逐級(jí)稀釋儲(chǔ)備液得到一系列的標(biāo)準(zhǔn)工作溶.5、25、50、100 和 200μg/mL。按選定的色譜條件，取 20μL 進(jìn)樣濃度(x) 進(jìn)行線性回歸，標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖 2-2 所示，得到線性回歸方6，R2=0.999。

圖 2-1 豆甾醇標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig. 2-1 Standard curve of stigmasterol鯊烯測(cè)定 Nenadis 等[122]方法：稱(chēng)取植物油 0.5 g，經(jīng)硅膠柱處理后，采的角鯊烯含量。準(zhǔn)確稱(chēng)取 20mg 角鯊烯溶于 100mL 的正己烷備液，然后用正己烷逐級(jí)稀釋儲(chǔ)備液得到一系列的標(biāo)準(zhǔn)工作溶25、50、100 和 200μg/mL。按選定的色譜條件，取 20μL 進(jìn)樣度(x) 進(jìn)行線性回歸，標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖 2-2 所示，得到線性回歸方R2=0.999。

圖 2-3 沒(méi)食子酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig. 2-3 standard curve of gallic acid換初榨葡萄籽油對(duì)小鼠脂代謝的影響驗(yàn)動(dòng)物和飼料配方齡 SPF 級(jí) C57BL/6J 小鼠 36 只，購(gòu)于上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有分成 3 組，每組 12 只。飼料配方參照 D12451[124]配制而成籽油和豬油替換 D12451 飼料配方中的食用油脂，得到相應(yīng)的籽油（GSO）組和豬油（Lard）組的高脂飼料配方，如表 2礦物質(zhì)的配方嚴(yán)格參照 AIN-93G[125]配制。高脂飼料中熱化合物占 35%，脂肪占 45%。實(shí)驗(yàn)小鼠飼養(yǎng)于 SPF 級(jí)動(dòng)物度控制在（23±2）℃，濕度 60%。每天喂食一次，分別給料，所有飼養(yǎng)操作均符合江南大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)工作

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本文編號(hào)：2834866