基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)作為一種軟電離質(zhì)譜技術(shù)被廣泛應(yīng)用于生物大分子和有機(jī)物高分子的分析。MALDI-TOF-MS具有高通量、快速,樣品處理簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn),尤其軟電離方式可以很好地保證分子的完整性,使其在小分子化合物的結(jié)構(gòu)鑒定與分析中表現(xiàn)出很大的優(yōu)勢(shì)和潛力。由于傳統(tǒng)的小分子基質(zhì)在分析小分子化合物時(shí)會(huì)在低分子量區(qū)域(m/z1000)產(chǎn)生大量的基質(zhì)加合分子離子峰、堿金屬加合峰、以及碎片峰干擾,使MALDI-TOF-MS在定量分析小分子的應(yīng)用中存在一定的局限性。沸石是一種具有催化性能的介孔材料,其表面具有豐富的布朗氏酸活性位點(diǎn),同時(shí)內(nèi)部具有規(guī)則的介孔結(jié)構(gòu),被認(rèn)為是一種具有潛力的MALDI基質(zhì)材料。傳統(tǒng)基質(zhì)結(jié)合介孔材料作為復(fù)合基質(zhì)可以有效解決上述問(wèn)題。本論文首次將沸石負(fù)載CHCA作為新型復(fù)合基質(zhì),將其應(yīng)用于MALDI-TOF-MS分析小分子化合物,并建立了實(shí)際樣品中恩諾沙星的定量分析方法。首先,考察了介孔沸石材料負(fù)載CHCA用于MALDI-TOF-MS分析小分子模型肽Substance P和氟喹諾酮類藥物等小分子的效果。在相同的質(zhì)譜條件下,與傳統(tǒng)CHCA進(jìn)行了比較,同時(shí)分別考察了ZSM-5沸石的硅鋁比(SiO_2/Al_2O_3)以及Beta與ZSM-5沸石的介孔大小對(duì)Substance P的檢測(cè)效果。結(jié)果表明,沸石負(fù)載CHCA新型復(fù)合基質(zhì)具有抑制堿金屬加合離子峰、消除干擾離子峰、簡(jiǎn)化與改善質(zhì)譜圖、提高測(cè)量重復(fù)性、提高離子化效率等優(yōu)點(diǎn)。沸石表面酸性越強(qiáng),介孔能夠充分包裹CHCA分子,則復(fù)合基質(zhì)抑制干擾碎片和提高離子化效率的能力越強(qiáng)。復(fù)合基質(zhì)被成功應(yīng)用于復(fù)雜樣品中氟喹諾酮類小分子化合物的分析。其次,進(jìn)一步考察了Beta沸石材料負(fù)載CHCA,應(yīng)用于MALDI-TOF-MS分析恩諾沙星的效果。實(shí)驗(yàn)中,分別制備了質(zhì)子、鈉離子及銀離子交換的Beta沸石,并在相同質(zhì)譜條件下進(jìn)行了比較研究,考察了不同離子交換的Beta沸石以及CHCA/BetaNa不同混合比例對(duì)恩諾沙星檢測(cè)結(jié)果的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,使用不同離子交換的Beta沸石作為基質(zhì)材料,能夠?qū)崿F(xiàn)恩諾沙星的選擇性離子化;同時(shí),Beta Na沸石負(fù)載CHCA新型復(fù)合基質(zhì)用于恩諾沙星小分子的分析中,具有抑制干擾分子離子峰、提高恩諾沙星質(zhì)譜峰強(qiáng)度等效果。沸石表面活性位點(diǎn)與恩諾沙星存在一定的相互作用關(guān)系,進(jìn)而影響MALDI-TOF-MS質(zhì)譜分析的離子化效率。復(fù)合基質(zhì)被成功應(yīng)用于中獸藥樣品中非法添加氟喹諾酮類藥物的篩查。第三,建立了BetaNa沸石負(fù)載CHCA作為新型復(fù)合基質(zhì)用于MALDI-TOF-MS定量分析復(fù)雜樣品中的恩諾沙星的分析方法。針對(duì)牛奶與蛋液兩類復(fù)雜樣品,通過(guò)添加同位素內(nèi)標(biāo)恩諾沙星-D_5,建立了MALDI-TOF-MS定量分析恩諾沙星小分子的方法。通過(guò)對(duì)實(shí)際樣品的前處理方法優(yōu)化,確定了效果最優(yōu)的提取劑,簡(jiǎn)化了溶液凈化等前處理步驟。通過(guò)在恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液與陽(yáng)性樣品中添加同一濃度的同位素內(nèi)標(biāo),將ENR/ENR-D_5質(zhì)子化峰強(qiáng)度比帶入標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線方程校正,計(jì)算出對(duì)應(yīng)牛奶或蛋液陽(yáng)性樣品中恩諾沙星的準(zhǔn)確含量。在0.5 mg/kg-6.0 mg/kg范圍內(nèi)線性良好,0.75 mg/kg-3.00 mg/kg濃度添加范圍內(nèi)的回收率在92%-101%之間,并使用LC-MS/MS檢測(cè)方法對(duì)測(cè)試結(jié)果進(jìn)行了對(duì)比驗(yàn)證。
【學(xué)位單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：TQ424.25
【部分圖文】：

中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 引言質(zhì)檢測(cè)的完整性，并且提出該方法具有快速、準(zhǔn)確、高通量等優(yōu)點(diǎn)，田中耕一等人也因此獲得 2002年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)，MALDI-TOF-MS 技術(shù)對(duì)生命科學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展做出了重大的貢獻(xiàn)。由于 MALDI 所使用的激光源多為脈沖式光源，易與脈沖質(zhì)量分析器相匹配，如飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(TOF-MS)與傅里葉變換質(zhì)譜儀（FT-MS）(Sunner et al, 1995)。MALDI-TOF-MS 質(zhì)譜儀結(jié)構(gòu)如圖 1-1 所示，由離子源、質(zhì)量分析器與檢測(cè)器三部分組成。離子在離子源產(chǎn)生后，在脈沖電場(chǎng)加速下飛入無(wú)場(chǎng)漂移管，并以恒定的速度到達(dá)檢測(cè)器。m/z 越大的離子，飛行的速度越慢，到達(dá)檢測(cè)器的時(shí)間越長(zhǎng)，其飛行時(shí)間的平方 t2與質(zhì)荷比 m/z 成正比，根據(jù)這一原理，可以將不同 m/z的離子按照到達(dá)檢測(cè)器的時(shí)間長(zhǎng)短進(jìn)行分離(Jurinke et al, 2004)。MALDI 與 TOF 相結(jié)合，原理上而言能夠檢測(cè)的分子量范圍不受限制。此外，MALDI-TOF-MS 儀器可以配備“離子鏡”，使用電場(chǎng)反射粒子，加長(zhǎng)離子飛行路徑，從而提高儀器分辨率，如今，商用反射模式的 TOF 儀器分辨率 m /Δm 已經(jīng)遠(yuǎn)高于 20000 FWHM（半峰寬，Δm 表示峰值高度 50％處的峰寬）。

圖 1-2 MALDI 源樣品離子化過(guò)程示意圖re1-2 The schematic diagram of sample ionization process by MALDI s 機(jī)理發(fā)展，MALDI 質(zhì)譜已成為生命科學(xué)領(lǐng)域最重要的分析檢測(cè)工子化機(jī)理仍未被完全了解，主要原因：沒(méi)有一個(gè)機(jī)理可以完整al, 2003)。MALDI 離子源作為一種軟電離技術(shù)，在質(zhì)譜圖中獲多電荷離子峰、部分碎片離子峰以及自由基離子峰 (Chen Y.C接受的的 MALDI 電離假設(shè)機(jī)理是 Karas 及 Hillenkamp 等人提, 2003)。在多光子吸收機(jī)理中，基質(zhì)吸收一個(gè)光子進(jìn)入高能過(guò)帶電基團(tuán)基質(zhì)，因此，可以在 MALDI 質(zhì)譜中觀察到自由基質(zhì)能預(yù)計(jì)在 9eV~10eV 之間，而 N2激光器產(chǎn)生的 2 個(gè)光子能量只完全捕獲，因此，無(wú)法將全部的基質(zhì)激發(fā)電離。樣品離子化瞬離子繼續(xù)衍生，致使 MALDI 質(zhì)譜圖中產(chǎn)生少量碎片離子峰。紫外激光器提供的單光子能量低 1 到 2 個(gè)數(shù)量級(jí)，所以，這種離子化機(jī)理(Karas et al, 1987)。根據(jù)這一假設(shè)，基質(zhì)分子吸收

論文 品前處理簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，若能開(kāi)發(fā)出準(zhǔn)確的定量方法。具有介孔結(jié)構(gòu)的硅鋁酸鹽材料，被廣泛用作工業(yè)催M(jìn)/n2O Al2O3 xSiO2 yH2O （1-6）子；n：金屬離子的氧化數(shù)；x：SiO2的分子數(shù)；y晶置換，具有電負(fù)性的 Si-O-Al 鍵，需要被 H+、N電中性，如圖 1-3 所示。由于這些陽(yáng)離子的活性較生離子交換，被離子交換后的沸石具有不同的酸性石還具有吸附分離性、熱穩(wěn)定性、導(dǎo)電性、催化性等

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