非小細(xì)胞肺癌是臨床上最常見(jiàn)的肺癌病理類(lèi)型,嚴(yán)重威脅著人類(lèi)的生命健康�，F(xiàn)有的非小細(xì)胞肺癌治療藥物效果有限,并伴隨著嚴(yán)重的毒副作用。因此,尋求高效、低毒的非小細(xì)胞肺癌治療藥物已成為目前醫(yī)學(xué)工作研究的熱點(diǎn)。本文利用高通量篩選技術(shù)對(duì)Top Science商品化小分子庫(kù)進(jìn)行篩選,得到了四種對(duì)TP53缺失的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系Calu-1(鱗癌)具有良好殺傷活性的化合物。其中化合物101對(duì)上述細(xì)胞系Calu-1表現(xiàn)出了明顯優(yōu)于其他三種化合物的殺傷活性(IC_(50)=3.55μM),并且對(duì)正常細(xì)胞沒(méi)有明顯影響。在此基礎(chǔ)上,本文選取化合物101作為先導(dǎo)化合物,結(jié)合生物活性測(cè)試數(shù)據(jù),逐步設(shè)計(jì)并成功合成了11種未見(jiàn)報(bào)道的全新異吲哚啉類(lèi)似物,通過(guò)~1H NMR,~(13)C NMR以及HR-MS對(duì)化合物進(jìn)行表征,并分析了化合物結(jié)構(gòu)與生物活性間的構(gòu)效關(guān)系。在生物活性試驗(yàn)方面,我們完成了11種異吲哚啉類(lèi)似物對(duì)非小細(xì)胞肺癌的活性抑制實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示,異吲哚啉衍生物和四氫異喹啉衍生物的殺傷活性分別提高2倍和4倍,此外,雖然異吲哚啉二酮衍生物和苯并VA嗪衍生物對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞沒(méi)有明顯的殺傷活性,但也在一定程度上為異吲哚啉類(lèi)似物提供了設(shè)計(jì)思路,初步實(shí)現(xiàn)了非小細(xì)胞肺癌治療藥物構(gòu)效關(guān)系的探究,為新型非小細(xì)胞肺癌治療藥物的研發(fā)提供了一定參考。
【學(xué)位單位】：上海應(yīng)用技術(shù)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：TQ460.1
【部分圖文】：

且化學(xué)合成藥物在醫(yī)藥領(lǐng)域所占比重不斷增加，越來(lái)越多的化學(xué)合成藥物進(jìn)入到臨床疾病的治療中。目前，化學(xué)合成分子庫(kù)中供我們篩選的分子庫(kù)有 SPECS 分子庫(kù)、Drugbank分子庫(kù)和 Top Science 商品化小分子庫(kù)等，雖然前兩個(gè)分子庫(kù)化合物數(shù)量巨大，但是年代比較久遠(yuǎn)，已被很多醫(yī)藥研發(fā)人員進(jìn)行篩選。非小細(xì)胞肺癌作為一種長(zhǎng)期難以攻克的疾病，傳統(tǒng)的分子庫(kù)難以滿(mǎn)足篩選要求，需要全新結(jié)構(gòu)的化合物庫(kù)進(jìn)行篩選。Top Science 商品化小分子庫(kù)是 Top Science 專(zhuān)有的小分子庫(kù)，分子庫(kù)中約有 800 個(gè)結(jié)構(gòu)多樣的化合物，而且其他靶點(diǎn)在這個(gè)分子庫(kù)中篩選出活性很好的小分子化合物，一定程度上提高了篩選的有效率。因此，我們挑選 Top Science商品化小分子庫(kù)作為我們篩選的樣品庫(kù)。2.4 先導(dǎo)化合物的篩選本章通過(guò)對(duì) Top Science 商品化小分子庫(kù)中化合物進(jìn)行高通量篩選，最終我們發(fā)現(xiàn)分子庫(kù)中 TS-207、TS-332(化合物 101)、TS-403 和 TS-607 等 4 種化合物對(duì) TP53 缺失的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系 Calu-1 增殖有很好抑制作用(如圖 2.1 所示)以及不錯(cuò)的半數(shù)抑制活性(如表 2.1 所示)。

第 12 頁(yè)上海應(yīng)用技術(shù)大學(xué) 碩士學(xué)位論文h，當(dāng)堿的量為 1 倍當(dāng)量時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，利用薄層色譜(TLC)對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行檢測(cè)，在紫外燈下沒(méi)有觀(guān)測(cè)到新的熒光點(diǎn)生成。經(jīng)過(guò)對(duì)反應(yīng)的探究，我們將堿的量加大到 2 倍當(dāng)量時(shí)，利用 TLC 點(diǎn)板對(duì)反應(yīng)進(jìn)行監(jiān)測(cè)，紫外燈下發(fā)現(xiàn)原料的熒光點(diǎn)消失，并且有新的熒光點(diǎn)生成，萃取濃縮后經(jīng)柱層析(展開(kāi)劑：乙酸乙酯/石油醚=1:1，v/v)分離，得到深紅褐色的液體。為了確定新物質(zhì)的結(jié)構(gòu)，對(duì)其進(jìn)行了一系列的結(jié)構(gòu)表征，得到了該物質(zhì)的核磁共振氫譜(如圖 2.4 所示)、核磁共振碳譜(如圖 2.5所示)和高分辨質(zhì)譜(如圖 2.6 所示)。我們對(duì)新物質(zhì)的核磁共振氫譜和碳譜進(jìn)行特征峰歸屬，基本確定其結(jié)構(gòu)為先導(dǎo)化合物 101，同時(shí)結(jié)合高分辨質(zhì)譜得到的分子離子峰m/z [M+H]+：310.14377與先導(dǎo)化合物101的[M+H]+理論分子量310.14375很相近，據(jù)此可確定該實(shí)驗(yàn)方法分離得到的化合物是先導(dǎo)化合物 101。

圖 2.6 化合物 101 的高分辨質(zhì)譜圖Fig.2.6 HR-MS of compound 1012.5.2 先導(dǎo)化合物 101 活性驗(yàn)證在合成先導(dǎo)化合物 101 的基礎(chǔ)上，我們利用體外藥敏試驗(yàn)(MTT 比色分析法)對(duì)先導(dǎo)化合物 101 進(jìn)行生物活性檢測(cè)(具體步驟詳見(jiàn)第四章)，通過(guò)對(duì)比高通量篩選數(shù)據(jù)與自主實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，來(lái)確定高通量篩選數(shù)據(jù)與自主設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的一致性。自主實(shí)驗(yàn)通過(guò)設(shè)置多個(gè)實(shí)驗(yàn)孔來(lái)避免因主觀(guān)因素帶來(lái)的實(shí)驗(yàn)誤差，從而提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。我們通過(guò)分析自主實(shí)驗(yàn)結(jié)果(IC50= 3.55 μM)，與高通量篩選的數(shù)值(IC50= 3.54 μM)相一致。

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