【摘要】：瑪咖(Lepidium meyenii Walp)是一種十字花科獨(dú)行菜屬一年生或兩年生的草本植物,含有豐富的營養(yǎng)成分且營養(yǎng)結(jié)構(gòu)合理。這些營養(yǎng)成分賦予瑪咖抗氧化、抗疲勞、抗癌、改善性功能、提高生育能力、神經(jīng)保護(hù)、抗骨質(zhì)疏松及緩解更年期綜合癥等生物活性。基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS)是一種具有高通量、高靈敏度、高耐鹽性、分析速度快、樣本消耗小、樣品制備簡單、無碎片化等特點(diǎn)的“軟電離”質(zhì)譜分析技術(shù)。由MALDI離子源發(fā)展起來的質(zhì)譜成像(MSI)技術(shù)在生物學(xué),代謝組學(xué)等領(lǐng)域發(fā)展快速。這種技術(shù)能夠同時(shí)獲得數(shù)百個(gè)分子離子在生物組織中的空間信息。與其他傳統(tǒng)成像方法相比,不需要特殊的染色或標(biāo)記,且有著較高的檢測靈敏度及較強(qiáng)的分子鑒定能力。本文采用MSI技術(shù)研究了瑪咖中的活性成分的分布,內(nèi)容如下:首先,使用MALDI-TOF MSI技術(shù)研究了瑪咖中咪唑類生物堿Lepidiline A和Lepidiline B在小鼠的心、肝、腎、脾中的代謝情況及空間分布。結(jié)果表明:這類咪唑類生物堿均勻分布在心臟、肝臟的皮質(zhì)區(qū)域和腎臟的髓質(zhì)區(qū)。在肝臟的髓質(zhì)、腎臟的皮質(zhì)和心臟組織血管區(qū)未發(fā)現(xiàn)它們的分布。該方法得到的咪唑生物堿在小鼠心、肝、脾、腎中的代謝情況和靶向定位,為研究咪唑類生物堿體內(nèi)代謝機(jī)理提供了依據(jù)。其次,采用雙溶液法合成的納米金(AuNPs)膠體溶液具有制備簡單、溶液穩(wěn)定、尺寸均一等特點(diǎn)。由于用AuNPs作為MALDI基質(zhì)分析生物樣品時(shí)能與樣品形成良好的共結(jié)晶,且具有背景干擾小,耐鹽性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。因此,成功的用于分析小分子(Mw500)生物樣品,如氨基酸、糖類、游離脂肪酸等。最后,以AuNPs為基質(zhì)分析了瑪咖鮮根組織中的化學(xué)成分及并可視化的研究了這些成分的分布。結(jié)果表明:使用MALDI-TOF MS能檢測到瑪咖鮮根中的氨基酸、糖類、咪唑類及酰胺類生物堿;MALDI-TOF MSI可以觀察到這些化學(xué)成分在瑪咖鮮根組織中的區(qū)域分布。進(jìn)一步驗(yàn)證了AuNPs作為MALDI基質(zhì)分析生物樣品及用于植物組織成像的可行性。
【學(xué)位授予單位】：云南師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：O657.63;TQ464
【圖文】：

24圖 2.1 瑪咖提取物正離子掃描模式下的 MALDI-TOF 質(zhì)譜圖Figure 2.1 Positive ion MALDI-TOF mass spectrum of Maca extract.瑪咖的主要活性物質(zhì)是生物堿，已經(jīng)有很多關(guān)于生物堿的活性作用的報(bào)道傳統(tǒng)提取植物生物堿的方法提取了瑪咖中的生物堿，提取液濃縮后備用�，斂崛悠�，用 70%的甲醇溶解成濃度為 10 mg/mL 的溶液，使用移液槍 1 uL 溶液，點(diǎn)在進(jìn)樣靶上，室溫氮?dú)饬鞲稍锖筮M(jìn)行質(zhì)譜分析。圖 2.1 為瑪咖生物堿提取物在正離子模式下的 MALDI-TOF 質(zhì)譜圖，其中 277.1699 和 291.1855 為質(zhì)譜圖中信號最強(qiáng)的兩個(gè)分子離子峰。這兩個(gè)峰通過ICR MS 和 MALDI-TOF/TOF MS 的 LIFT 技術(shù)進(jìn)行鑒定。如圖 2.2（a）和（b），基于 CID 的碎裂方式，母離子 m/z 277.1699 的主要碎片峰為 m/z 185.10791.0542。其中最大的碎片峰 m/z 185.1072 是由母體離子 m/z 277.1699 丟失一

第 2 章 MALDI MSI 研究瑪咖中的咪唑類生物堿在小鼠體內(nèi)的代謝和分布2.3.2 咪唑類生物堿的代謝圖 2.3 為空白組和喂食瑪咖提取物 3 h 后的小鼠肝臟切片的代表性 MALDI質(zhì)譜圖。兩組的質(zhì)譜圖相比較，發(fā)現(xiàn)喂食瑪咖 3 h 后的質(zhì)譜圖中，只出現(xiàn)了咪唑生物堿 Lepidiline A 和 B，沒有其他代謝物存在。在質(zhì)譜成像之前，我們在同樣的條件下，檢測了喂食咪唑生物堿提取物 1 h、2 h、3 h、4 h、6 h、10 h 后的肝臟切片的中均未發(fā)現(xiàn)新的代謝物。附錄中給出了喂食瑪咖提取物 1 h、2 h、3 h、4 h、6 h、10 h 后 Lepidiline A 和 B 在心肝、脾、腎的質(zhì)譜成像的平均質(zhì)譜圖，分別和空白組的平均質(zhì)譜圖比較，也未發(fā)現(xiàn)新的代謝物。推測咪唑生物堿在小鼠體內(nèi)沒產(chǎn)生新的代謝物，并且在 6 h 后很少能檢測到咪唑生物堿的峰。在此基礎(chǔ)上，合理推測喂食咪唑類生物堿后小鼠體內(nèi)不會(huì)產(chǎn)生新的代謝產(chǎn)物。因此，我們用 MALDI-MSI 研究了 LepidilineA 和 B 在肝、腎、心、脾組織中的代謝和分布。

圖 2.4 喂食生物堿后小鼠不同器官中 Lepidiline A 的 MALDI MSI 圖像。Lepidiline A 不同時(shí)間間隔在（a）肝、（b）腎、（c）心臟和（d）脾臟組織中的 MALDI MSI 分布，標(biāo)尺：2 mmFigure 2.4 MALDI MSI of Lepidiline Ain different organs after feeding alkaloid. MALDI MSIdistribution of Lepidiline Ain (a) liver, (b) kidney, (c)heart and (d) spleen tissues of mice at differentperiods, respectively. Scale bar: 2 mm.

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 甘瑾;馮穎;張弘;何釗;鄭華;李嫻;;三種色型瑪咖甾醇組分及含量分析[J];林業(yè)科學(xué)研究;2013年01期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 周嚴(yán)嚴(yán);瑪咖化學(xué)成分分析及其神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制研究[D];中國中醫(yī)科學(xué)院;2017年

本文編號：2807206