【摘要】：靈芝是一味珍貴的藥食兩用真菌,具有強身健體、延年益壽的功效,在中國有著悠久的歷史記載。紫芝是靈芝家族中的重要成員,與赤芝一同收錄于2000年版的《中國藥典》中,成為法定靈芝藥材之一。多糖作為紫芝中的主要活性成分,具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗腫瘤、降糖保肝、解毒等多種功效。目前,紫芝多糖的研究集中于菌絲體多糖及子實體水溶胞內(nèi)多糖,然而已有研究表明,食用菌的細(xì)胞壁中的多糖成分也有良好的免疫活性,提取紫芝水溶性胞內(nèi)多糖后,也剩余有大量的殘渣,因此有必要對紫芝水提后的殘渣進(jìn)行研究,尋找可以進(jìn)一步開發(fā)的活性多糖。本論文以紫芝子實體水提后的殘渣為研究對象,通過超微粉碎、提取、分離純化獲得紫芝細(xì)胞壁多糖,并對分離、純化的多糖的理化性質(zhì)、化學(xué)結(jié)構(gòu)和免疫活性進(jìn)行考察,為紫芝細(xì)胞壁多糖的深入開發(fā)利用提供科學(xué)數(shù)據(jù)。本論文的主要研究結(jié)果如下:通過對紫芝子實體水提殘渣進(jìn)行超微粉碎、熱水浸提、分步醇沉(30%、50%、70%)獲得紫芝細(xì)胞壁多糖粗提物(30%、50%、70%醇沉沉淀和70%醇沉上清組分)。對醇沉組分樣品的得率、多糖含量、分子量分布和單糖組成進(jìn)行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),多糖粗提物的總得率為2%,其得率顯著高于紫芝子實體水溶性胞內(nèi)多糖的得率。多糖粗提物主要集中在30%、70%醇沉沉淀和70%醇沉上清部分;按照分子量分布的大小,又可將粗提物分為大分子量組分(~10~6 g/mol)和小分子量組分(10~3~10~4g/mol)。各組分的多糖含量均高于75%,大分子量組分的多糖含量為98.99%,單糖組成主要以葡萄糖為主;小分子量組分(~10~4 g/mol)的多糖含量為97.17%,小分子量組分(~10~3 g/mol)的多糖含量為75.33%,小分子量組分中除了具有與子實體水溶性胞內(nèi)多糖相同的五種單糖(巖藻糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖、木糖)外,還含有少量的葡萄糖胺和葡萄糖醛酸組分。通過低濃度乙醇沉淀、離子交換柱層析和凝膠柱層析對醇沉粗提物進(jìn)一步的分離純化,共獲得7個均一多糖。從30%醇沉組分中分離出1個大分子量(155.2?10~4g/mol)的均一葡聚糖GSCW30E-20E;通過離子柱層析從70%醇沉組分中洗脫分離出水相組分GSCW70E-W(2.2?10~4 g/mol)和鹽相組分GSCW70E-S(2.5?10~4g/mol),其中鹽相組分表現(xiàn)出一定的體外免疫活性。通過離子柱層析、凝膠柱層析從70%醇沉上清中分離出4個小分子量均一多糖,GSCW70EU-W2(5.6?10~4g/mol)、GSCW70EU-W4(0.8?10~4 g/mol)、GSCW70EU-S1(55.1?10~4 g/mol)、GSCW70EU-S2(3.2?10~4 g/mol)。其中GSCW70EU-W4為主要組分,具有顯著的體外免疫活性。通過紅外光譜分析、甲基化分析以及核磁共振分析對部分均一多糖的結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征,對大分子量多糖GSCW30E-20E的結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析:大分子量葡聚糖GSCW30E-20E既具有α構(gòu)型也有β構(gòu)型。每9個β-(1,3)-葡萄糖殘基和1個α-(1,4)-葡萄糖殘基相連為主鏈,每3個β-(1,3)-葡萄糖殘基主鏈上通過β-(1,6)-糖苷鍵連有一個葡萄糖殘基為支鏈。小分子量組分GSCW70E-W和GSCW70EU-W4既具有α構(gòu)型也有β構(gòu)型,GSCW70E-S只具有β構(gòu)型。此3個小分子量組分多糖結(jié)構(gòu)的主鏈以β(1,3)、β(1,4)和β(1,6)連接為主,支鏈在β(1,3,4)和β(1,3,6)上。
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：TQ281
【圖文】：

化的糖醇乙酰酯 鏈接方式 保留時間 摩爾比,4,6-Me4-Glcp Glcp(1→12.60 7.49,6-Me3-Glcp →3)-Glcp-(1→13.79 12.76,6-Me3-Glcp →4)-Glcp-(1→13.94 6.48,4-Me3-Glcp →6)-Glcp-(1→14.26 2.50,6-Me2-Glcp →3,4)-Glcp-(1→15.63 1.00,4-Me2-Glcp →3,6)-Glcp-(1→15.74 5.54均一多糖的核磁共振分析 GSCW30E-20E 的 NMR 分析圖 4-9 所示，在1H NMR 譜中, 異頭區(qū) 4.2-5.8 的范圍內(nèi)，有四個信號分07、 4.52、 4.49、 4.21，其中 5.07 的異頭氫信號，說明含有 構(gòu)型葡萄 4.52、 4.49 和 4.21 說明含有 β 構(gòu)型葡萄糖殘基。

通過 HSQC 譜確定對應(yīng)的碳的化學(xué)位移。殘基 B 和 D MeG 的標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)位移相比往低場強移動，說明發(fā)生了取代，因3)- -D-Glcp-(1→。氫的化學(xué)位移是 4.52，說明該糖殘基是 β 構(gòu)型。通過從 COSY過交叉峰找到 H-2 的位置，其化學(xué)位移是 3.28。H-3 和 H-4 通過Y 譜進(jìn)行歸屬，化學(xué)位移分別為 3.48 和 3.24。通過 HSQC 譜中 68.86，確定 H-6 的化學(xué)位移為 4.02 和 3.54。H-5 通過 H-6交叉峰和 TOCSY 譜中的信號確定為 3.47。殘基 C 中的所有 H，通過 HSQC 譜確定對應(yīng)的碳的化學(xué)位移。殘基 C 的 C-3（8）MeG 的標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)位移相比往低場強移動，說明發(fā)生了取代，→3,6)- -D-Glcp-(1→。頭氫的化學(xué)位移是 4.21，說明該糖殘基是 β 構(gòu)型。H2-H6 的化學(xué)的 COSY、TOCSY 以及 HSQC 中得到歸屬。同時根據(jù)氫的化學(xué)找到碳的化學(xué)位移。將殘基 E 的化學(xué)位移值與文獻(xiàn)[16]對比十分-D-Glcp-（1→。

GSCW30E-20E的核磁共振TOCSY譜

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本文編號：2776025