【摘要】：葉黃素是一種含有40個碳原子并具有9個共軛雙鍵和兩個紫羅酮環(huán)的長鏈萜類化合物,具有很強的抗氧化性能,同時可以起到保護視網(wǎng)膜、減少白內(nèi)障/夜盲癥等多種生理功能,通常只能通過攝食含有葉黃素的動植物等組織進行機體補充。但是葉黃素水溶性差,且極易受環(huán)境因素影響降解,口服后機體內(nèi)的生物利用度偏低。因此如何提高葉黃素的水溶性,進一步提高其機體的吸收與利用率是亟待解決的問題。本課題利用牛血清白蛋白(BSA)與葡聚糖(dextran)經(jīng)美拉德反應形成的接枝產(chǎn)物作為包埋葉黃素的載體,研究分析BSA-dextran載體對葉黃素的包埋效果以及形成的BSA-dextran-葉黃素的性質和功能性。首先以乳化活性為評價指標,利用單因素(包括蛋白濃度、底物配比、緩沖液pH值、時間、溫度)實驗以及響應面法,優(yōu)化了濕法制備BSA-Dextran接枝產(chǎn)物的美拉德反應工藝條件,并利用SDS-PAGE電泳、高效液相色譜、紅外光譜、熒光光譜等手段檢驗和表征了生成產(chǎn)物的分子量、純度、關鍵基團以及結構等特征;利用表面疏水性、氣泡特性、熱穩(wěn)定性等手段檢驗了生成產(chǎn)物的功能性質。結果得到:當牛血清白蛋白濃度為2.78 mg/mL,dextran與BSA摩爾質量比為6.89:1,緩沖液體系pH值為8.50,反應時間為2.3 h,反應溫度為95℃時,得到的接枝產(chǎn)物乳化活性最高,為31.743m~2/g,分子量約152 kDa,純度89.449%;與BSA相比,紅外光譜分析顯示接枝產(chǎn)物的α-螺旋和β-折疊含量減少,β-轉角和無規(guī)則卷曲含量增加,且在1000 cm~(-1)處新增了C-O鍵的吸收峰;內(nèi)源熒光光譜分析顯示,酪氨酸參與了接枝反應,最大吸收發(fā)生了藍移,且熒光強度降低;表面疏水性指數(shù)為58529,增加了34904;起泡性為41.6%,增加了9.93%,泡沫穩(wěn)定性為65.13%,增加了13.88%;熱穩(wěn)定性在100℃水浴1 h情況下仍能保持在100.33%,與BSA相比(70℃水浴1 h熱穩(wěn)定性僅47.88%)有了較大的提高。另外,利用乙醇注入-高壓均質法制備兩種納米顆粒,即牛血清白蛋白-葉黃素納米顆粒(BSA-lutein)和牛血清白蛋白-葡聚糖-葉黃素納米顆粒(DBSA-lutein)。通過有機溶劑洗滌法結合SDS增溶法測定葉黃素的包封率,動態(tài)光散射法計算納米顆粒的粒徑、PDI值及Zeta電位,并檢測了比較其與葉黃素的貯藏穩(wěn)定性。結果顯示:DBSA-lutein包封率為95.86%、粒徑為176.8±6.5 nm(PDI 0.176±0.07)、Zeta電位-30.5±0.6 mV,BSA-lutein包封率為77.82%、粒徑為166.7±8.6 nm(PDI 0.276±0.05)、Zeta電位-18.6±1.0 mV。兩種納米顆粒的貯藏穩(wěn)定性與葉黃素相比有了明顯的提高,且DBSA-lutein的包封率更高、納米顆粒更穩(wěn)定、貯藏穩(wěn)定性更好。最后通過體外模擬胃腸液消化模型研究BSA-lutein和DBSA-lutein對葉黃素控釋性能,結果表明:模擬胃液中,BSA-lutein和DBSA-lutein都能保持結構的相對穩(wěn)定,累積釋放率很低(分別為8.69%和6.07%),能夠很好的保護葉黃素;在模擬腸液中,復合胰酶使得二者的粒徑和PDI值增大,破壞了納米顆粒的結構,導致二者的累積釋放率較高(分別為40.18%和24.57%);膽酸鹽能促進納米顆粒的解體,加快葉黃素的釋放,提高了生物利用度(分別為51.5%和72.5%)。
【圖文】：

圖 2-2 時間對 DBSAH乳化活性和接枝度的影響-2 Effects of time on emulsifying activity and Grafting Degree of D比對 DBSAH乳化活性及接枝度的影響系溫度為 90.0 ℃，，反應時間 2.0 h，緩沖液體系 pH 值調(diào)節(jié)底物配比為 1:3、1:1、3:1、5:1、7:1，研究所得產(chǎn)果如圖 2-3 所示。

圖 2-2 時間對 DBSAH乳化活性和接枝度的影響-2 Effects of time on emulsifying activity and Grafting Degree of D比對 DBSAH乳化活性及接枝度的影響系溫度為 90.0 ℃，反應時間 2.0 h，緩沖液體系 pH 值調(diào)節(jié)底物配比為 1:3、1:1、3:1、5:1、7:1，研究所得產(chǎn)果如圖 2-3 所示。
【學位授予單位】：天津商業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：TQ460.1;TB383.1

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本文編號：2627835