【摘要】：植物多糖,一種廣泛存在于植物體內(nèi)的天然大分子多糖,具有極其重要的生物活性。黃芪多糖是我國大宗藥材黃芪的主要活性成分之一,在黃芪的不同藥材基源中,尤以產(chǎn)自山西省北部至內(nèi)蒙古自治區(qū)中南部的正北芪(蒙古黃芪)Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.monghulicus(Bge.)Hsiao 多糖含量最高,療效最佳,因而備受業(yè)界推崇。眾多研究表明,黃芪多糖可改善由潰瘍性結(jié)腸炎引發(fā)的腸粘膜損傷、膜通透性改變等病理變化,有效治療潰瘍性結(jié)腸炎。本文以正北芪為原料,采用超聲輔助-水提法提取正北芪粗多糖,通過響應面分析法優(yōu)化提取工藝并得到最佳工藝參數(shù),經(jīng)除雜分離純化后得到正北芪多糖;通過一系列理化檢驗和特征分析,探究正北芪多糖的理化性質(zhì)和結(jié)構(gòu)特性;通過對動物實驗指標的測定比較,研究正北芪多糖的部分活性功能。主要結(jié)果如下:(1)選取超聲時間、水浴時間、超聲功率、料液比四個因素,在單因素實驗基礎上采用響應面分析法優(yōu)化提取工藝。經(jīng)響應面實驗得到最佳工藝參數(shù):超聲時間46 min、超聲功率414 W、水浴時間41 min、料液比為1:23(g/mL),在此條件下正北芪粗多糖提取率為(20.77±0.12)%。(2)將最優(yōu)條件提取得到的正北芪粗多糖,通過木瓜蛋白酶-Sevage聯(lián)用法除去其中蛋白質(zhì),經(jīng)DEAE-52纖維素柱分離,收集洗脫峰面積最大的組分,用Sephadex G-100柱純化,洗脫曲線呈單一對稱峰。經(jīng)測定,純化后的正北芪多糖含量為96.82%。(3)將純化后的正北芪多糖進行理化性質(zhì)鑒定,結(jié)果表明:正北芪多糖為淡黃色絮狀固體,易溶于水,不溶于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、正丁醇等有機溶劑;純化后的正北芪多糖中有糖類存在,不含有還原性糖、淀粉、蛋白質(zhì),是一類均一多糖;高效液相色譜分析結(jié)果表明,正北芪多糖的單糖組成為甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、阿拉伯糖,各單糖物質(zhì)的量比為5.97:1.05:1:8.41:24.15;紅外光譜分析結(jié)果表明,純化后的正北芪多糖符合多糖的典型結(jié)構(gòu)。(4)利用不同劑量正北芪多糖治療由5%葡聚糖硫酸鈉(DSS)水溶液誘導的潰瘍性結(jié)腸炎小鼠,實驗證明,正北芪多糖高劑量組(0.7 mg/mL)可以顯著降低患病小鼠的疾病活動指數(shù)(DAI)評分、恢復結(jié)腸長度及改善和修復結(jié)腸組織損壞;顯著降低患病小鼠結(jié)腸組織中髓過氧化物酶(MPO)、一氧化氮合酶(NOS)活力和一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)水平,增加結(jié)腸組織中超氧化物歧化酶(SOD)活力;顯著降低患病小鼠血清中白細胞介素6(IL-6)、白細胞介素1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的濃度以及二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸(D-LA)水平。由此證明,日常飲用0.7 mg/mL正北芪多糖溶液7 d可以有效治療小鼠由5%DSS誘導的潰瘍性結(jié)腸炎。
【圖文】：

Ｆｉｇ．邋２．１邋ＳＥＭ邋ｒｅｓｕｌｔｓ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｓｌｉｃｅｓ邋ｏｆ邋Ａｓｔｒａｇａｌｉ邋ｒａｄｉｘ邋ｄｒｙ邋ｐｒｏｄｕｃｔ邋（ａ．邋Ｃｒｏｓｓ邋ｓｅｃｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｘｙｌｅｍ；邋ｂ．逡逑Ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ邋ｓｅｃｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｘｙｌｅｍ；邋ｃ．邋Ｃｒｏｓｓ邋ｓｅｃｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｐｈｌｏｅｍ；邋ｄ．邋Ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ邋ｓｅｃｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｐｈｌｏｅｍ）逡逑通過圖２．１可以看出，多糖顆粒主要存在于正北芪初皮部。正北芪含有大量纖維逡逑組織，傳統(tǒng)熱水提取法無法將黃芪內(nèi)部的多糖顆粒完全溶解，利用超聲波細胞破碎儀逡逑可將黃芪粉末破碎更加完全，從而提高多糖提取率。逡逑２．２．２正北芪多糖粗提取逡逑原材料的處理：將正北芪洗凈切段，烘干至恒溫后將其放入磨粉機磨粉，過６０逡逑目篩得到粉末，置于干燥容器中保存?zhèn)溆�。逡逑將磨粉后的正北芪粉末加入一定量的蒸餾水，使用超聲波細胞破碎儀將其充分破逡逑碎，之后在４０°Ｃ條件下水浴一定時間。水浴結(jié)束后將不溶物與液體一并轉(zhuǎn)入離心管，逡逑４０００ｒ／ｍｉｎ條件下離心１５ｍｉｎ，，取上清液于干凈的燒杯或離心管中，邊攪拌邊向其中逡逑加入５倍體積無水乙醇

之后迅速加入濃硫酸５邋ｍＬ，搖勾，靜置５邋ｍｉｎ，沸水浴１５邋ｍｉｎ，取出后冰浴５邋ｍｉｎ。逡逑以空白為對照，４９０邋ｎｍ處測定吸光度值（ＯＤ）；以葡萄糖溶液濃度（ｎｇ／ｍＬ）為橫逡逑坐標、吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線，如圖２．２所示。逡逑１．０－逡逑Ｐ逡逑Ｅ逡逑｜邋（１．８－邋■逡逑Ｓ邋（，６．逡逑０．０邐Ｉ邐１邐１邐１邐１邐１邐＞逡逑０．００邐２．００邐４．００邐６．００邐８．００邐１０．００邋１２．００邋１４．００逡逑葡萄糖濃度Ｗｇ／＇ｍＬ）逡逑圖２．２葡萄糖標準曲線逡逑Ｆｉｇ．邋２．２邋Ｇｌｕｃｏｓｅ邋ｓｔａｎｄａｒｄ邋ｃｕｒｖｅ逡逑線性回歸方程：Ａ＝０．０６１２Ｃ—０．０］６；相關系數(shù)：於＝０．９９７８，式中Ｃ邋（ｐｇ／ｍＬ）為逡逑葡萄糖溶液濃度，Ａ是對應的吸光度值，標準仙線如圖。逡逑ＩＩ逡逑
【學位授予單位】：北京林業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：TQ281;TS201.4

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本文編號：2622116