超低溫保存技術(shù)是最有效、安全的長期保存種質(zhì)資源的方法,但某些物種在超低溫保存后出現(xiàn)存活率低或不能再生長的情況。目前,動(dòng)物和人類細(xì)胞、組織的超低溫保存研究已經(jīng)證實(shí)超低溫誘導(dǎo)的程序性細(xì)胞死亡(PCD)是造成存活率下降的關(guān)鍵原因之一,但在植物中,超低溫保存誘導(dǎo)的PCD研究還很少。因此,從PCD方面來揭示植物超低溫保存損傷機(jī)制,可為植物超低溫保存技術(shù)優(yōu)化提供新的思路和方法,對(duì)種質(zhì)資源保存具有重要意義。本文以繁殖率高、細(xì)胞基因型一致,但超低溫保存后再生困難的春石斛’紅夢(mèng)幻’(Dendrobium nobile Lindl.’Hamana Lake Dream’)的類原球莖(PLBs)為材料,研究了玻璃化超低溫保存中PCD的發(fā)生情況,明確PCD發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié),在此基礎(chǔ)上,探討一氧化氮(NO)和過氧化氫(H202)作為信號(hào)分子在超低溫保存誘導(dǎo)的PCD中的作用機(jī)制。其主要研究結(jié)果如下:(1)春石斛’紅夢(mèng)幻’ PLBs在玻璃化超低溫保存程序中的玻璃化溶液(PVS2)處理和液氮冷凍-解凍環(huán)節(jié)發(fā)生了 PCD,具體表現(xiàn)在形態(tài)和生化兩方面:①PLBs經(jīng)PVS2處理后出現(xiàn)質(zhì)壁分離、細(xì)胞核變形、胞內(nèi)小囊泡形成、核仁...

【文章頁數(shù)】：169 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１．１采用差示掃描量熱（ＤＳＣ）記錄的ＰＶＳ２冷凍和解凍過程（Ｓａｋａｉ，Ｋｏｂａｙａｓｈｉ?ｅｔａｌ．，?１９９０）??Ｆｉｇｕｒｅ?１．１?ＤＳＣ?ｒｅｃｏｒｄ?ｏｆ?ＰＶＳ２?ｄｕｒｉｎｇ?ｃｏｏｉｎｇ?ａｎｄ?ｒｅｗａｎｎｉｎｇ?（Ｓａｋａｉ，?

是指高濃度的低溫保護(hù)溶液過冷至極低溫度，最終凝固成亞穩(wěn)態(tài)玻璃的冷卻速度結(jié)晶的物理過程（Ｆａｈｙ，Ｍａｃｆａｒｌａｎｅｅｔａｌ．，?１９８４），它是一種成的途徑，當(dāng)生物組織中的空間被玻璃化溶液填充時(shí)，就可以避免細(xì)凍時(shí)遭受冰晶損傷和其他額外的損傷，如組織塌陷、溶質(zhì)濃縮、脫水度變化及組....

圖1.4本研究的技術(shù)路線

圖2.2玻璃化超低溫保存各步驟中春石解‘紅夢(mèng)幻’PLBs組織切片

?春石斛類原球莖玻璃化超低溫保存中程序性細(xì)胞死亡研究???ＰＶＳ２處理后ＰＬＢｓ組織細(xì)胞學(xué)特征見圖２．２?ｄ：與前一步驟相比，ＰＶＳ２處理后??ＰＬＢｓ細(xì)胞收縮，質(zhì)壁分離更是加重，分生組織處細(xì)胞核染色較深，核形狀變得不規(guī)??則，核仁不可見。??經(jīng)液氮冷凍－解凍處理和ｕｎｌｏａｄｉ....

圖2.4未經(jīng)任何處理的春石解‘紅夢(mèng)幻’PLBs超微結(jié)構(gòu)

?春石斛類原球莖玻璃化超低溫保存中程序性細(xì)胞死亡研宄???２．２．２．１春石斛新鮮ＰＬＢｓ（ＣＫ）的細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)??從圖２．４可以看出，對(duì)照組ＰＬＢｓ細(xì)胞體積大，細(xì)胞膜與細(xì)胞壁緊緊貼合，液泡??占據(jù)細(xì)胞中較大空間，細(xì)胞質(zhì)中含有較多淀粉粒，在細(xì)胞膜周圍聚集分布。圖２．４?ｂ??示大....

本文編號(hào)：3973360