番茄(Solanum lycopersicum)是常見(jiàn)的溫室栽培蔬菜。但是,高溫、干旱、高鹽等非生物脅迫因素對(duì)番茄的產(chǎn)量和生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生了極大的影響。因此研究番茄耐非生物脅迫的機(jī)制對(duì)于提高番茄的逆境栽培以及育種效率具有非常重要的意義。促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)級(jí)聯(lián)能夠影響植物對(duì)于生物脅迫和非生物脅迫的耐受性。MAPK級(jí)聯(lián)是典型的三級(jí)聯(lián)模式,主要包括MAPKKK(MAPK激酶激酶)、MAPKK(MAPK激酶)和MAPK。MAPK主要是通過(guò)磷酸化特定的下游底物來(lái)激活下游的細(xì)胞應(yīng)答。研究MAPK的互作蛋白對(duì)于理解MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)至關(guān)重要。本實(shí)驗(yàn)室前期研究結(jié)果表明,番茄S1MPK1(促分裂原活化蛋白激酶)在逆境脅迫過(guò)程中發(fā)揮重要作用,但是其具體的分子基礎(chǔ)和生理機(jī)制并不清楚。本研究前期通過(guò)Y2H篩選能夠和S1MPK1相互作用的蛋白,發(fā)現(xiàn)一個(gè)未經(jīng)報(bào)道的新蛋白ID(Solyc03g117670)命名為S1SKI。為了進(jìn)一步深入探究番茄S1SKI的功能及作用機(jī)理,本研究對(duì)S1MPK1和SlSKI的相互作用進(jìn)一步進(jìn)行驗(yàn)證,并且通過(guò)轉(zhuǎn)化擬南芥獲得過(guò)表達(dá)SlSKI材料,以探討SlSKI對(duì)于非生物脅迫的響...

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
符號(hào)說(shuō)明
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 MAPK級(jí)聯(lián)簡(jiǎn)介
    2 植物MAPK級(jí)聯(lián)的功能
    3 MAPK在擬南芥中的研究進(jìn)展
    4 MAPK在番茄中的研究進(jìn)展
    5 MAPK相互作用蛋白的研究進(jìn)展
        5.1 MAPK相互作用蛋白的研究方法
        5.2 MAPK下游底物的研究進(jìn)展
        5.3 MAPK非底物的互作蛋白研究進(jìn)展
    6 研究目的和意義
第二章 SlMPK1與SlSKI的互作驗(yàn)證
    1 前言
        1.1 酵母雙雜交技術(shù)的原理及應(yīng)用
        1.2 蛋白純化和pull-down技術(shù)的原理及應(yīng)用
        1.3 體外磷酸化技術(shù)的原理及應(yīng)用
        1.4 實(shí)驗(yàn)室前期研究
    2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1 菌種及載體
        2.2 實(shí)驗(yàn)儀器及耗材
        2.3 相關(guān)試劑配制
    3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 Pull-down實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證互作
        3.2 體外磷酸化實(shí)驗(yàn)
        3.3 酵母雙雜交互作驗(yàn)證
    4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.1 PGEX-4T-1-SlSKI重組質(zhì)粒載體構(gòu)建
        4.2 蛋白純化
        4.3 Pull-down
        4.4 體外磷酸化
        4.5 SlSKI片段截取
        4.6 pGBKT7/SlSKI1-7載體構(gòu)建
        4.7 pGADT7/SlMPK1與pGBKT7/SlSKI酵母菌落鑒定
        4.8 SlSKI自激活檢測(cè)
        4.9 pGADT7/SlMPK1與pGBKT7/SlSKI互作驗(yàn)證
    5 小結(jié)
第三章 SlSKI在擬南芥中的功能研究
    1 前言
    2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1 擬南芥種子
        2.2 實(shí)驗(yàn)儀器及試劑
        2.3 培養(yǎng)基配制
    3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 過(guò)表達(dá)載體pBI121-SlSKI載體構(gòu)建
        3.2 擬南芥異源過(guò)表達(dá)
        3.3 過(guò)表達(dá)SlSKI擬南芥株系萌發(fā)統(tǒng)計(jì)
        3.4 過(guò)表達(dá)SlSKI擬南芥株系根長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)
        3.5 過(guò)表達(dá)SlSKI擬南芥株系高溫下胚軸實(shí)驗(yàn)
        3.6 過(guò)表達(dá)SlSKI擬南芥株系高溫抗氧化生理測(cè)定
    4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.1 過(guò)表達(dá)載體構(gòu)建
        4.2 過(guò)表達(dá)材料獲得
        4.3 NaCl對(duì)過(guò)表達(dá)SlSKI擬南芥生長(zhǎng)的影響
        4.4 山梨醇對(duì)過(guò)表達(dá)SlSKI擬南芥生長(zhǎng)的影響
        4.5 ABA對(duì)過(guò)表達(dá)SlSKI擬南芥生長(zhǎng)的影響
        4.6 高溫對(duì)過(guò)表達(dá)SlSKI擬南芥生長(zhǎng)的影響
        4.7 高溫脅迫下過(guò)表達(dá)SlSKI擬南芥抗氧化酶活性的變化
    5 小結(jié)
第四章 SlSKI在番茄中的功能研究
    1 前言
    2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1 植物材料
        2.2 菌種及載體
        2.3 酶和相關(guān)試劑
        2.4 激素
        2.5 培養(yǎng)基配置
        2.6 番茄營(yíng)養(yǎng)液配方
    3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 組織定位
        3.2 SlSKI過(guò)表達(dá)載體構(gòu)建
        3.3 RNA干擾載體構(gòu)建
        3.4 CRISPR-Cas9載體構(gòu)建
        3.5 番茄組培
    4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.1 SlSKI組織表達(dá)分析
        4.2 SlSKI的逆境應(yīng)答表達(dá)分析
        4.4 SlSKI過(guò)表達(dá)載體構(gòu)建
        4.5 干擾載體雙酶切鑒定
        4.6 CRISPR-Cas9載體測(cè)序
        4.7 組培過(guò)程
        4.8 過(guò)表達(dá)陽(yáng)性鑒定
        4.9 CRISPR-Cas9陽(yáng)性苗鑒定
        4.10 RNA干擾陽(yáng)性苗鑒定
        4.11 RNA干擾陽(yáng)性苗半定量鑒定
    5 小結(jié)
第五章 總結(jié)與討論
參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果
致謝



本文編號(hào)：3973340