番茄(Solanum lycopersicum)是常見的溫室栽培蔬菜。但是,高溫、干旱、高鹽等非生物脅迫因素對番茄的產(chǎn)量和生長發(fā)育產(chǎn)生了極大的影響。因此研究番茄耐非生物脅迫的機制對于提高番茄的逆境栽培以及育種效率具有非常重要的意義。促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)級聯(lián)能夠影響植物對于生物脅迫和非生物脅迫的耐受性。MAPK級聯(lián)是典型的三級聯(lián)模式,主要包括MAPKKK(MAPK激酶激酶)、MAPKK(MAPK激酶)和MAPK。MAPK主要是通過磷酸化特定的下游底物來激活下游的細胞應(yīng)答。研究MAPK的互作蛋白對于理解MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)至關(guān)重要。本實驗室前期研究結(jié)果表明,番茄S1MPK1(促分裂原活化蛋白激酶)在逆境脅迫過程中發(fā)揮重要作用,但是其具體的分子基礎(chǔ)和生理機制并不清楚。本研究前期通過Y2H篩選能夠和S1MPK1相互作用的蛋白,發(fā)現(xiàn)一個未經(jīng)報道的新蛋白ID(Solyc03g117670)命名為S1SKI。為了進一步深入探究番茄S1SKI的功能及作用機理,本研究對S1MPK1和SlSKI的相互作用進一步進行驗證,并且通過轉(zhuǎn)化擬南芥獲得過表達SlSKI材料,以探討SlSKI對于非生物脅迫的響...

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
符號說明
第一章 文獻綜述
    1 MAPK級聯(lián)簡介
    2 植物MAPK級聯(lián)的功能
    3 MAPK在擬南芥中的研究進展
    4 MAPK在番茄中的研究進展
    5 MAPK相互作用蛋白的研究進展
        5.1 MAPK相互作用蛋白的研究方法
        5.2 MAPK下游底物的研究進展
        5.3 MAPK非底物的互作蛋白研究進展
    6 研究目的和意義
第二章 SlMPK1與SlSKI的互作驗證
    1 前言
        1.1 酵母雙雜交技術(shù)的原理及應(yīng)用
        1.2 蛋白純化和pull-down技術(shù)的原理及應(yīng)用
        1.3 體外磷酸化技術(shù)的原理及應(yīng)用
        1.4 實驗室前期研究
    2 實驗材料
        2.1 菌種及載體
        2.2 實驗儀器及耗材
        2.3 相關(guān)試劑配制
    3 實驗方法
        3.1 Pull-down實驗驗證互作
        3.2 體外磷酸化實驗
        3.3 酵母雙雜交互作驗證
    4 實驗結(jié)果
        4.1 PGEX-4T-1-SlSKI重組質(zhì)粒載體構(gòu)建
        4.2 蛋白純化
        4.3 Pull-down
        4.4 體外磷酸化
        4.5 SlSKI片段截取
        4.6 pGBKT7/SlSKI1-7載體構(gòu)建
        4.7 pGADT7/SlMPK1與pGBKT7/SlSKI酵母菌落鑒定
        4.8 SlSKI自激活檢測
        4.9 pGADT7/SlMPK1與pGBKT7/SlSKI互作驗證
    5 小結(jié)
第三章 SlSKI在擬南芥中的功能研究
    1 前言
    2 實驗材料
        2.1 擬南芥種子
        2.2 實驗儀器及試劑
        2.3 培養(yǎng)基配制
    3 實驗方法
        3.1 過表達載體pBI121-SlSKI載體構(gòu)建
        3.2 擬南芥異源過表達
        3.3 過表達SlSKI擬南芥株系萌發(fā)統(tǒng)計
        3.4 過表達SlSKI擬南芥株系根長實驗
        3.5 過表達SlSKI擬南芥株系高溫下胚軸實驗
        3.6 過表達SlSKI擬南芥株系高溫抗氧化生理測定
    4 實驗結(jié)果
        4.1 過表達載體構(gòu)建
        4.2 過表達材料獲得
        4.3 NaCl對過表達SlSKI擬南芥生長的影響
        4.4 山梨醇對過表達SlSKI擬南芥生長的影響
        4.5 ABA對過表達SlSKI擬南芥生長的影響
        4.6 高溫對過表達SlSKI擬南芥生長的影響
        4.7 高溫脅迫下過表達SlSKI擬南芥抗氧化酶活性的變化
    5 小結(jié)
第四章 SlSKI在番茄中的功能研究
    1 前言
    2 實驗材料
        2.1 植物材料
        2.2 菌種及載體
        2.3 酶和相關(guān)試劑
        2.4 激素
        2.5 培養(yǎng)基配置
        2.6 番茄營養(yǎng)液配方
    3 實驗方法
        3.1 組織定位
        3.2 SlSKI過表達載體構(gòu)建
        3.3 RNA干擾載體構(gòu)建
        3.4 CRISPR-Cas9載體構(gòu)建
        3.5 番茄組培
    4 實驗結(jié)果
        4.1 SlSKI組織表達分析
        4.2 SlSKI的逆境應(yīng)答表達分析
        4.4 SlSKI過表達載體構(gòu)建
        4.5 干擾載體雙酶切鑒定
        4.6 CRISPR-Cas9載體測序
        4.7 組培過程
        4.8 過表達陽性鑒定
        4.9 CRISPR-Cas9陽性苗鑒定
        4.10 RNA干擾陽性苗鑒定
        4.11 RNA干擾陽性苗半定量鑒定
    5 小結(jié)
第五章 總結(jié)與討論
參考文獻
在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果
致謝



本文編號：3973340