柑橘在我國農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)上具有重要地位,柑橘的優(yōu)質(zhì)豐產(chǎn)是其在國際柑橘市場(chǎng)上的核心競(jìng)爭(zhēng)力。無核一直是柑橘育種追求的目標(biāo)性狀。細(xì)胞融合技術(shù),為柑橘無核育種提供了一條快捷的途徑,即通過融合單倍體(n)原生質(zhì)體與二倍體(2n)原生質(zhì)體獲得三倍體�；谶@一思路,本研究利用‘早金’甜橙單倍體愈傷系與其它6個(gè)二倍體有核柑橘品種的葉肉或愈傷親本融合,旨在獲得綜合雙親優(yōu)點(diǎn)的三倍體新種質(zhì)。另外,本研究采用SSR分子標(biāo)記對(duì)實(shí)驗(yàn)室前期獲得的一批融合再生植株進(jìn)行了倍性和遺傳分析。主要研究結(jié)果如下:1.單倍體愈傷原生質(zhì)體+二倍體葉肉原生質(zhì)體融合創(chuàng)制三倍體。以‘早金’甜橙單倍體愈傷系Fa為親本,分別與6個(gè)二倍體種間良種的葉肉原生質(zhì)體融合。各組合融合產(chǎn)物在后期培養(yǎng)過程中均逐漸死亡,經(jīng)多次(每個(gè)組合至少3次)嘗試都未再生成功,表明單倍體愈傷原生質(zhì)體與二倍體葉肉原生質(zhì)體融合較難再生。2.單倍體愈傷原生質(zhì)體+二倍體愈傷原生質(zhì)體融合創(chuàng)制三倍體。分別以‘早金’甜橙單倍體愈傷系Fa、Ec為親本,與‘默科特’橘橙(MCK)愈傷組織原生質(zhì)體融合,得到Fa+MCK組合的再生愈傷組織,倍性測(cè)定為二倍體與四倍體的混倍體,得到Ec+MCK組合的再...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 引言
    2 前人研究進(jìn)展
        2.1 柑橘無核育種研究進(jìn)展
            2.1.1 柑橘無核機(jī)理
            2.1.2 無核柑橘獲得途徑
                2.1.2.1 自然途徑獲得無核種質(zhì)
                2.1.2.2 人工途徑獲得無核種質(zhì)
                    2.1.2.2.1 三倍體無核種質(zhì)的獲得途徑
                    2.1.2.2.2 其它無核種質(zhì)的獲得途徑
        2.2 細(xì)胞融合在柑橘無核育種中的應(yīng)用
            2.2.1 創(chuàng)制三倍體體細(xì)胞雜種
                2.2.1.1 配子（n）—體細(xì)胞(2n)融合創(chuàng)制三倍體
                2.2.1.2 體細(xì)胞（n）——體細(xì)胞（2n）融合創(chuàng)制三倍體
            2.2.2 創(chuàng)制二倍體胞質(zhì)雜種轉(zhuǎn)移CMS性狀
            2.2.3 細(xì)胞融合創(chuàng)制異源四倍體
        2.3 原生質(zhì)體融合后代的鑒定
            2.3.1 倍性鑒定
                2.3.1.1 形態(tài)學(xué)鑒定
                2.3.1.2 細(xì)胞學(xué)鑒定
            2.3.2 遺傳物質(zhì)的來源鑒定
                2.3.2.1 RFLP
                2.3.2.2 RAPD
                2.3.2.3 AFLP
                2.3.2.4 SSR
    3 本研究的目的和內(nèi)容
第二章 柑橘體細(xì)胞融合創(chuàng)制三倍體無核新種質(zhì)
    1 引言
    2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 單倍體愈傷 + 二倍體葉肉融合模式
            2.1.2 單倍體愈傷 + 二倍體愈傷融合模式
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備
            2.2.2 柑橘原生質(zhì)體的分離與純化
            2.2.3 柑橘原生質(zhì)體活力測(cè)定
            2.2.4 原生質(zhì)體融合
            2.2.5 融合細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.6 融合產(chǎn)物倍性分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析
        3.1 單倍體愈傷 + 二倍體葉肉融合模式
            3.1.1 原生質(zhì)體的分離、純化
            3.1.2 原生質(zhì)體融合
            3.1.3 融合產(chǎn)物培養(yǎng)情況
        3.2 單倍體愈傷 + 二倍體愈傷融合模式
            3.2.1 原生質(zhì)體分離、純化
            3.2.2 原生質(zhì)體融合情況
            3.2.3 融合產(chǎn)物培養(yǎng)情況
                3.2.3.1 ‘早金’甜橙單倍體愈傷Fa + ‘默科特’橘橙愈傷
                3.2.3.2 ‘早金’甜橙單倍體愈傷Ec + ‘默科特’橘橙愈傷
            3.2.4 倍性測(cè)定
    4 小結(jié)與討論
        4.1 不同融合組合再生情況的差異分析
            4.1.1 單倍體愈傷 + 二倍體葉肉融合未再生的原因分析
                4.1.1.1 遺傳差異的原因
                4.1.1.2 培養(yǎng)條件的影響
            4.1.2 單倍體愈傷 + 二倍體愈傷的融合再生情況的討論
                4.1.2.1 Fa+MCK、Ec+MCK再生產(chǎn)物形態(tài)上的比較
                4.1.2.2 Fa+MCK、Ec+MCK再生產(chǎn)物生胚能力上的比較
第三章 再生植株的鑒定
    1 引言
    2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 再生植株倍性分析
            2.2.2 分子標(biāo)記分析核基因組和細(xì)胞質(zhì)基因組
                2.2.2.1 融合材料全基因組DNA的提取
                2.2.2.2 PCR擴(kuò)增
                2.2.2.3 聚丙烯酰胺凝膠電泳
                2.2.2.4 SSR分析核基因組和胞質(zhì)基因組來源
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析
        3.1 G1 + ‘卡特’夏橙
            3.1.1 植株再生及倍性鑒定
            3.1.2 分子標(biāo)記分析核基因組及胞質(zhì)基因組來源
        3.2 G1 + ‘Itabori’甜橙
            3.2.1 植株再生及倍性鑒定
            3.2.2 分子標(biāo)記分析核基因組及胞質(zhì)基因組來源
        3.3 G1 + ‘默科特’橘橙
            3.3.1 植株再生及倍性鑒定
            3.3.2 分子標(biāo)記分析核基因組及胞質(zhì)基因組來源
    4 小結(jié)與討論
        4.1 核基因組鑒定結(jié)果復(fù)雜性的原因
            4.1.1 融合細(xì)胞的變異與復(fù)雜性
            4.1.2 其它因素
        4.2 關(guān)于胞質(zhì)基因組鑒定結(jié)果的討論
參考文獻(xiàn)
附錄Ⅰ 部分果實(shí)圖片
附錄Ⅱ BH3培養(yǎng)基配方
附錄Ⅲ 分子鑒定所用引物序列信息
致謝



本文編號(hào)：3950173