香蕉束頂病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)是矮縮病毒科(Nanaviridae)香蕉束頂病毒屬(Babuvirus)成員,其基因組由6個大小約1kb的環(huán)狀ssDNA組成,有的株系含有1-3個不同數(shù)量的衛(wèi)星組分。BBTV基因組中各組分除含有同源性很高的調(diào)控區(qū)外,幾乎每個組分含有1個開放閱讀框架(ORF)。BBTV各組分編碼不同的蛋白,行使不同的功能,其中DNA1編碼Rep蛋白,衛(wèi)星組分(S2、S4)編碼復(fù)制相關(guān)蛋白(RepA)。研究表明,DNA1編碼的Rep蛋白和衛(wèi)星組分編碼的RepA蛋白在病毒基因組滾環(huán)復(fù)制中起作用,在其頸環(huán)結(jié)構(gòu)區(qū)域進行剪切和連接,產(chǎn)生病毒基因組的各個環(huán)狀單鏈組分。已有研究發(fā)現(xiàn)DNA1編碼的Rep蛋白能夠?qū)NA1、DNA3、DNA5進行剪切和連接:衛(wèi)星組分(S2、S4)編碼的RepA蛋白能夠?qū)ψ陨斫M分起作用,進行剪切和連接,產(chǎn)生衛(wèi)星組分。但是Rep和RepA對DNA2、DNA4、DNA6等其他組份的復(fù)制也還不是很清楚。目前針對BBTV各組分基因編碼的蛋白作用尚不明確,其致病機理,與寄主間的相互作用等相關(guān)研究也不清楚。為了進一步研究BBTV...

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 香蕉束頂病毒概述
        1.1.1 香蕉束頂病毒及其引起的病害
        1.1.2 香蕉束頂病毒分子生物學(xué)研究進展
    1.2 植物病毒侵染性克隆的研究進展
        1.2.1 侵染性克隆的研究
        1.2.2 侵染性克隆常規(guī)構(gòu)建方法
        1.2.3 植物病毒侵染性克隆研究的生物學(xué)意義
    1.3 Rep/RepA研究進展
    1.4 本研究目的意義
    1.5 本研究技術(shù)路線
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 生物信息學(xué)分析工具
    2.2 方法
        2.2.1 香蕉總DNA提取
        2.2.2 引物設(shè)計
        2.2.3 多拷貝序列PCR擴增
        2.2.4 PCR產(chǎn)物膠回收
        2.2.5 膠回收產(chǎn)物的連接、轉(zhuǎn)化
        2.2.6 菌液PCR篩選陽性克隆
        2.2.7 質(zhì)粒提取
        2.2.8 侵染性克隆載體的構(gòu)建
        2.2.9 重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌EHA105
        2.2.10 瞬時轉(zhuǎn)化煙草
        2.2.11 瞬時轉(zhuǎn)化煙草檢測
3 結(jié)果與分析
    3.1 香蕉總DNA提取
    3.2 BBTV基因組份多拷貝克隆
    3.3 BBTV各組分多拷貝酶切驗證及序列測序分析
        3.3.1 BBTV各組分酶切驗證
        3.3.2 BBTV各組分多拷貝克隆測序分析結(jié)果
        3.3.3 BBTV侵染性克隆載體酶切驗證結(jié)果
    3.4 BBTV侵染性克隆檢驗
        3.4.1 BBTV DNA1瞬時轉(zhuǎn)化煙草
        3.4.2 BBTV DNA1和衛(wèi)星DNA混合侵染煙草
        3.4.3 BBTV DNA1與各組分混合侵染煙草
        3.4.4 BBTV衛(wèi)星組分與各組分混合侵染煙草
    3.5 本研究需進一步解決的問題
4 討論
    4.1 一步法擴增BBTV各組分多拷貝
    4.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)瞬時轉(zhuǎn)化煙草
    4.3 Rep/RepA對BBTV各基因組的調(diào)控
5 結(jié)論
參考文獻
附錄
發(fā)表文章
致謝



本文編號：3875849