NF-Y是一類轉(zhuǎn)錄因子,普遍存在于植物、動(dòng)物以及微生物中,是一個(gè)包含三個(gè)亞基NF-YA,NF-YB,NF-YC的三聚體蛋白。近年來,許多研究結(jié)果表明NF-Y家族成員參與植物生長發(fā)育和逆境響應(yīng)等多種生理過程。基于前期從青桿中分離克隆得到PwNF-YB8和PwNF-YB13基因,本研究對(duì)其轉(zhuǎn)錄活性、表達(dá)模式及其在花粉萌發(fā)中的功能進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)分析。主要研究結(jié)果如下:1、本研究通過保守結(jié)構(gòu)域、發(fā)育樹分析表明,PwNF-YB8和PwNF-YB13包含CBFD結(jié)構(gòu)域,屬于NF-Y家族成員。在進(jìn)化上PwNF-YB8和PwNF-YB13分別與擬南芥中的AtNF-YB8和AtNF-YB13親緣關(guān)系較近。2、組織特異性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明PwNF-YB8和PwNF-YB13在花粉中表達(dá)量相對(duì)于根、莖、針葉表達(dá)量最高,且對(duì)多種非生物脅迫、激素具有響應(yīng),但在有些脅迫下響應(yīng)模式上存在明顯差異。在ABA激素作用下,PwNF-YB8的表達(dá)量先下降后上升,而PwNF-YB13表達(dá)量則表現(xiàn)為先上升后下降的趨勢,整體表達(dá)量變化較小。鹽脅迫下,PwNF-YB8的響應(yīng)較明顯,在6h上升至對(duì)照的8倍,而PwNF-YB13的響應(yīng)則相對(duì)...

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略語表
1 引言
    1.1 轉(zhuǎn)錄因子的概念及其結(jié)構(gòu)特征
    1.2 植物中的特異性轉(zhuǎn)錄因子的主要類型及功能
    1.3 植物中NF-Y轉(zhuǎn)錄因子
    1.4 目的意義及內(nèi)容
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 所用菌種及質(zhì)粒類型
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)主要用的化學(xué)試劑
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器種類
        2.1.5 實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基及緩沖液配方
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 載體構(gòu)建
        2.2.2 擬南芥突變體鑒定
        2.2.3 擬南芥過表達(dá)植株的獲得
        2.2.4 蛋白互作驗(yàn)證試驗(yàn)
        2.2.5 洋蔥表皮亞細(xì)胞定位實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 擬南芥的栽培方法
        2.2.7 青桿的栽培方法
        2.2.8 青桿花粉體外萌發(fā)實(shí)驗(yàn)
        2.2.9 PwNF-YB8和PwNF-YB13生物信息學(xué)分析
        2.2.10 PwNF-YB8和PwNF-YB13表達(dá)模式分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)中所用的引物
        2.3.1 PwNF- YB8、PwNF-YB13及擬南芥中同源基因AtNF-YB8、AtNF-YB13 CDS區(qū)克隆引物
        2.3.2 PwNF- YB8、PwNF-YB13及擬南芥中同源基因爿AtNF-YB8、AtNF-YB13過表達(dá)載體引物
        2.3.3 PwNF-YB8、PwNF-YB13轉(zhuǎn)錄活性分析及雙雜引物
        2.3.4 PwNF-YB8、PwNF-YB13及PwHAP5表達(dá)量分析引物
        2.3.5 nf-yb8和nf-yb13突變體鑒定引物
        2.3.6 擬南芥純合突變體表達(dá)量檢測引物:
        2.3.7 擬南芥過表達(dá)植株鑒定引物
        2.3.8 花粉過表達(dá)載體引物
        2.3.9 熒光素酶互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)(LCI)引物
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 PwNF-YB轉(zhuǎn)錄因子蛋白保守結(jié)構(gòu)域及進(jìn)化樹分析
    3.2 PwNF-YB8和PwNF-YB13表達(dá)分析
    3.3 PwNF-YB8和PwNF-YB13亞細(xì)胞定位
    3.4 花粉萌發(fā)實(shí)驗(yàn)
    3.5 PwNF-YB8與PwHAP5互作
        3.5.1 PwNF-YB8和PwNF-YB13轉(zhuǎn)錄活性分析
        3.5.2 PwNF-YB8與PwHAP5互作實(shí)驗(yàn)
    3.6 擬南芥突變體鑒定
    3.7 過表達(dá)植株獲得與DNA水平鑒定
        3.7.1 陽性農(nóng)桿菌PCR鑒定
        3.7.2 過表達(dá)植株篩選與獲得
        3.7.3 過表達(dá)植株DNA水平鑒定
    3.8 花粉瞬時(shí)過表達(dá)功能研究
        3.8.1 花粉準(zhǔn)備
        3.8.2 基因槍轟擊
        3.8.3 花粉觀察與記錄
4 討論
5 結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡介
導(dǎo)師簡介
獲獎(jiǎng)成果目錄
致謝



本文編號(hào)：3851471