蘋果是我國(guó)北方地區(qū)重要的栽培果樹,具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。蘋果果實(shí)的內(nèi)在品質(zhì)衡量著蘋果商品性的優(yōu)劣,有機(jī)酸是決定果實(shí)風(fēng)味品質(zhì)的重要指標(biāo)之一。蘋果在采后貯藏過(guò)程中有機(jī)酸含量逐漸下降導(dǎo)致貯藏后期果實(shí)風(fēng)味變淡,極大地降低了果實(shí)的食用品質(zhì)。蘋果酸是蘋果果實(shí)中的主要有機(jī)酸。至今相關(guān)研究主要集中在蘋果發(fā)育過(guò)程中蘋果酸積累的遺傳及分子機(jī)制方面,對(duì)采后貯藏過(guò)程中蘋果酸的代謝及調(diào)控研究較少。鋁誘導(dǎo)蘋果酸轉(zhuǎn)運(yùn)體基因MdALMT9被認(rèn)為在蘋果果實(shí)酸度形成中起著關(guān)鍵作用,其主要負(fù)責(zé)向果肉細(xì)胞的液泡內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)蘋果酸,促進(jìn)蘋果酸的積累。然而,關(guān)于MdALMT9調(diào)控機(jī)制的研究鮮見(jiàn)報(bào)道,其參與的代謝通路尚不清楚。本文分別以‘粉紅女士’(Malus domestica Borkh.cv.Cripps Pink)、‘富士’(Malus domestica Borkh.cv.Fuji)、‘秦冠’(Malus domestica Borkh.cv.Qinguan)等果實(shí)為試材,探討了γ-GABA和Ca Cl₂處理對(duì)蘋果采后貯藏期間蘋果酸代謝的調(diào)控,并篩選出適宜的處理濃度,同時(shí)探究了不同品種蘋果采后貯藏期間蘋果酸...

【文章頁(yè)數(shù)】：116 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 引言
    1.2 果實(shí)中的有機(jī)酸
    1.3 蘋果酸的代謝研究
        1.3.1 蘋果酸參與的生理活動(dòng)及功能
        1.3.2 蘋果酸代謝的關(guān)鍵酶
    1.4 果實(shí)中有機(jī)酸代謝的調(diào)控
    1.5 蘋果酸的轉(zhuǎn)運(yùn)
    1.6 果實(shí)有機(jī)酸形成的分子生物學(xué)研究
    1.7 本研究的目的、意義及主要內(nèi)容
        1.7.1 本研究的目的及意義
        1.7.2 主要研究?jī)?nèi)容
第二章 γ-GABA和 CaCl₂處理對(duì)蘋果采后貯藏期間有機(jī)酸代謝的影響
    2.1 試驗(yàn)材料和方法
        2.1.1 試驗(yàn)材料和處理
        2.1.2 測(cè)定指標(biāo)及方法
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 γ-GABA處理對(duì)蘋果采后貯藏期間有機(jī)酸代謝的影響
        2.2.2 CaCl₂處理對(duì)蘋果采后貯藏期間有機(jī)酸代謝的影響
    2.3 討論
        2.3.1 γ-GABA處理對(duì)采后貯藏過(guò)程中蘋果酸代謝的影響
        2.3.2 CaCl₂處理對(duì)采后貯藏過(guò)程中蘋果酸代謝的影響
    2.4 小結(jié)
第三章 不同品種蘋果果實(shí)采后貯藏期間蘋果酸代謝特點(diǎn)研究
    3.1 試驗(yàn)材料及方法
        3.1.1 試驗(yàn)材料及處理
        3.1.2 試驗(yàn)方法
    3.2 結(jié)果及分析
        3.2.1 不同品種蘋果采后貯藏期間蘋果酸含量的變化
        3.2.2 乙烯及1-MCP處理對(duì)不同品種蘋果蘋果酸含量的影響
        3.2.3 RNA-seq篩選果實(shí)衰老進(jìn)程中呼吸代謝途徑差異表達(dá)基因
        3.2.4 乙烯及1-MCP處理對(duì)蘋果酸代謝關(guān)鍵基因表達(dá)的影響
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
第四章 蘋果鋁誘導(dǎo)蘋果酸轉(zhuǎn)運(yùn)體基因MdALMT9 的克隆及功能分析
    4.1 試驗(yàn)材料
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 RNA提取與c DNA合成
        4.2.2 基因克隆
        4.2.3 生物信息學(xué)分析
        4.2.4 MdALMT9 亞細(xì)胞定位
        4.2.5 農(nóng)桿菌介導(dǎo)番茄轉(zhuǎn)化
        4.2.6 番茄果實(shí)蘋果酸和檸檬酸含量檢測(cè)
        4.2.7 啟動(dòng)子克隆及分析
        4.2.8 農(nóng)桿菌介導(dǎo)瞬時(shí)侵染番茄
        4.2.9 GUS活性測(cè)定及GUS組織化學(xué)染色
    4.3 結(jié)果及分析
        4.3.1 MdALMT9 克隆及序列分析
        4.3.2 MdALMT9 亞細(xì)胞定位及表達(dá)特性分析
        4.3.3 MdALMT9 在蘋果采后貯藏過(guò)程中的表達(dá)特性
        4.3.4 過(guò)表達(dá)MdALMT9 促進(jìn)番茄果實(shí)蘋果酸和檸檬酸的積累
        4.3.5 MdALMT9 啟動(dòng)子克隆及啟動(dòng)活性分析
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第五章 鋁誘導(dǎo)蘋果酸轉(zhuǎn)運(yùn)體基因MdALMT9 的調(diào)控機(jī)制研究
    5.1 試驗(yàn)材料及處理
    5.2 試驗(yàn)方法
        5.2.1 蘋果酸含量檢測(cè)
        5.2.2 煙草雙熒光素酶檢測(cè)
        5.2.3 酵母單雜交試驗(yàn)
        5.2.4 原核表達(dá)
        5.2.5 凝膠遷移實(shí)驗(yàn)(EMSA)
        5.2.6 蘋果果實(shí)瞬時(shí)沉默試驗(yàn)
        5.2.7 蘋果愈傷組織遺傳轉(zhuǎn)化
    5.3 結(jié)果及分析
        5.3.1 AP2/ERF家族轉(zhuǎn)錄因子篩選
        5.3.2 乙烯響應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子對(duì)MdALMT9 啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)控
        5.3.3 乙烯響應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子MdERF017的自激活驗(yàn)證
        5.3.4 EMSA及酵母單雜交驗(yàn)證
        5.3.5 番茄同源基因的調(diào)控效應(yīng)驗(yàn)證
        5.3.6 Md ERF017和Md ERF017-like亞細(xì)胞定位及表達(dá)特性分析
        5.3.7 過(guò)表達(dá)Md ERF017和Md ERF017-like促進(jìn)蘋果愈傷組織蘋果酸積累
        5.3.8 瞬時(shí)沉默Md ERF017、Md ERF017-like導(dǎo)致蘋果果實(shí)蘋果酸含量下降
        5.3.9 Md ERF017、Md ERF017-like參與逆境脅迫響應(yīng)
    5.4 討論
    5.5 小結(jié)
第六章 結(jié)論與創(chuàng)新點(diǎn)
    6.1 結(jié)論
    6.2 創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附錄
縮略詞
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3847454