藍莓是重要的小漿果作物,其果實營養(yǎng)價值高,有益于人體健康,因此近年來消費需求量穩(wěn)定地增加。而藍莓植株在生產(chǎn)中容易受到干旱、低溫和鹽等逆境脅迫的危害,限制了藍莓的生產(chǎn)和栽培面積的擴大等。因此,闡明藍莓的耐逆性機制和提高藍莓的抗逆性對藍莓生產(chǎn)具有重要的指導(dǎo)意義。MYB轉(zhuǎn)錄因子和小熱激蛋白(Small heat shock protein,sHSP)在響應(yīng)逆境脅迫中發(fā)揮著多方面的作用。本研究旨在獲得藍莓(Vaccinium corymbosum L.)sHSP基因及調(diào)控原花青素(Proanthocyanidins,PAs)合成相關(guān)的MYB轉(zhuǎn)錄因子及其啟動子,并對其特性和功能進行初步分析,建立了‘杰兔’藍莓品種的葉片再生體系,以期為提高藍莓抗逆性和藍莓抗逆育種研究提供理論依據(jù)和奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1.通過RT-PCR法和RACE技術(shù)克隆得到了藍莓的轉(zhuǎn)錄因子VcMYB,其三級結(jié)構(gòu)含有Myb-DNA-binding結(jié)構(gòu)域,預(yù)測VcMYB蛋白定位于細胞核,與Vaccinium uliginosum的VuMYB的同源性高,親緣關(guān)系近。2.煙草瞬時表達結(jié)果顯示,VcMYB定位于細胞核。3.用qR...

【文章頁數(shù)】：115 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表
1. 引言
    1.1. 研究背景
    1.2. MYB轉(zhuǎn)錄因子與原花青素合成與調(diào)控研究進展
        1.2.1. 原花青素及其代謝
        1.2.2. MYB轉(zhuǎn)錄因子與原花青素代謝調(diào)控
    1.3. 植物熱激蛋白研究進展
        1.3.1. 植物熱激蛋白(HSP)
        1.3.2. 植物小熱激蛋白(sHSP)
    1.4. 藍莓葉片再生研究進展
        1.4.1. 藍莓葉片再生的影響因素
        1.4.2. 藍萄葉片再生與遺傳轉(zhuǎn)化
    1.5. 研究目的和意義
    1.6. 主要研究內(nèi)容
    1.7. 技術(shù)路線
2. 藍莓VcMYB轉(zhuǎn)錄因子的功能研究
    2.1. 試驗材料
        2.1.1. 植物材料
        2.1.2. 載體和菌株
        2.1.3. 化學試劑
        2.1.4. 試驗儀器設(shè)備
        2.1.5. 培養(yǎng)基和溶液配制
    2.2. 試驗方法
        2.2.1. RNA的提取
        2.2.2. cDNA的合成
        2.2.3. DNA的提取
        2.2.4. 擬南芥的培養(yǎng)
        2.2.5. VcMYB轉(zhuǎn)錄因子的克隆
        2.2.6. 生物信息學分析
        2.2.7. 表達載體構(gòu)建
        2.2.8. 擬南芥轉(zhuǎn)化
        2.2.9. 瞬時轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化本生煙
        2.2.10. 熒光定量PCR
        2.2.11. VcMYB啟動子的克隆與擬南芥轉(zhuǎn)化
        2.2.12. 引物
    2.3. 結(jié)果與分析
        2.3.1. 提取藍莓總RNA
        2.3.2. 獲得VcMYB全長
        2.3.3. VcMYB生物信息學分析
        2.3.4. VcMYB亞細胞定位分析
        2.3.5. VcMYB表達模式分析
        2.3.6. VcMYB轉(zhuǎn)基因擬南芥的獲得與鑒定
        2.3.7. VcMYB啟動子的獲得與功能分析
    2.4. 討論
    2.5. 小結(jié)
3. 藍莓VcHSP17.7基因的功能研究
    3.1. 試驗材料
        3.1.1. 植物材料
        3.1.2. 菌株和載體
        3.1.3. 試驗儀器設(shè)備
        3.1.4. 試驗試劑和培養(yǎng)基
    3.2. 試驗方法
        3.2.1. VcHSP17. 7基因全長擴增
        3.2.2. VcHSP17.7生物信息學分析
        3.2.3. 表達載體構(gòu)建
        3.2.4. 擬南芥轉(zhuǎn)化
        3.2.5. 轉(zhuǎn)化本生煙草
        3.2.6. 擬南芥和藍莓的脅迫處理
        3.2.7. 生理指標的測定
        3.2.8. 熒光定量PCR
        3.2.9. VcHSP17.7基因啟動子的克隆
        3.2.10. VcHSP17.7的原核表達
        3.2.11. 引物
    3.3. 結(jié)果與分析
        3.3.1. 獲得VcHSP17.7基因全長
        3.3.2. VcHSP17.7生物信息學分析
        3.3.3. VcHSP17.7基因表達特性
        3.3.4. VcHSP17.7基因亞細胞定位分析
        3.3.5. VcHSP17.7轉(zhuǎn)基因擬南芥的獲得與鑒定
        3.3.6. VcHSP17.7基因啟動子的獲得與分析
        3.3.7. VcHSP17.7基因原核表達
    3.4. 討論
    3.5. 小結(jié)
4. 藍莓葉片再生體系的建立
    4.1. 材料與方法
        4.1.1. 試驗材料與培養(yǎng)條件
        4.1.2. 試驗方法
    4.2. 結(jié)果與分析
        4.2.1. 藍莓試管苗的獲得及增殖
        4.2.2. 藍莓葉片再生體系的建立
    4.3. 討論
    4.4. 小結(jié)
5. 總結(jié)與展望
    5.1. 全文總結(jié)
    5.2. 主要創(chuàng)新點
    5.3. 展望
參考文獻
附錄
個人簡介
導(dǎo)師簡介
獲得成果目錄清單
致謝



本文編號：3831721