土壤鹽漬化是一個(gè)世界性問題,已經(jīng)嚴(yán)重制約作物的生長和發(fā)育。培育優(yōu)良的耐鹽作物品系是改善這一現(xiàn)象的有效途徑。甜瓜(Cucumis melo L.)是世界上經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高的園藝作物,具有相對(duì)較強(qiáng)的耐鹽性,可以成為培育新型耐鹽作物的研究資源。植物對(duì)于鹽脅迫響應(yīng)和抵抗是極其復(fù)雜的過程。土壤中高濃度的鹽分會(huì)導(dǎo)致植物根部產(chǎn)生滲透脅迫,影響植物對(duì)于鉀離子的吸收,致使K⁺/Na⁺的下降,導(dǎo)致植物體內(nèi)的正常代謝受到破壞。鉀離子通道是調(diào)節(jié)鉀元素吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)的最主要的方式,推測(cè)其應(yīng)該參與了植物的耐鹽性調(diào)控。MIRK(Melon Inward Rectifying K⁺Channel,Gene Bank accession number:DQ116940)是本課題組前期從網(wǎng)紋甜瓜“春麗”中克隆的一個(gè)K⁺通道基因,并且將其表達(dá)到非洲爪蟾卵母(Xenopus oocytes)細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)介導(dǎo)鉀離子流時(shí)受到了外源Na⁺的抑制作用,并且Na⁺對(duì)MIRK的抑制作用可能是由于MIRK氨基酸序列中的...

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 我國土壤鹽漬化現(xiàn)狀
    1.2 植物耐鹽機(jī)理的研究進(jìn)展
        1.2.1 植物避鹽機(jī)理
        1.2.2 滲透調(diào)節(jié)機(jī)理
        1.2.3 活性氧清除機(jī)理
        1.2.4 鹽分區(qū)域化機(jī)理
    1.3 鉀離子通道基因的研究現(xiàn)狀
        1.3.1 離子通道的特性
        1.3.2 鉀離子通道的分類
        1.3.3 植物中鉀離子通道相關(guān)基因的研究
    1.4 鉀離子通道耐鹽性的研究以及植物基因轉(zhuǎn)化技術(shù)
        1.4.1 鉀離子通道與適應(yīng)鹽脅迫
        1.4.2 植物基因轉(zhuǎn)化技術(shù)研究
    1.5 甜瓜與耐鹽性及甜瓜MIRK基因的研究進(jìn)展
        1.5.1 甜瓜與耐鹽性
        1.5.2 甜瓜MIRK基因的研究進(jìn)展
    1.6 本研究的目的意義
    1.7 研究內(nèi)容、研究方法和技術(shù)路線
        1.7.1 研究的主要內(nèi)容
        1.7.2 研究方法
        1.7.3 技術(shù)路線
第二章 甜瓜鉀離子通道基因MIRK人工改造基因的構(gòu)建及電生理檢測(cè)
    2.1 材料與試劑
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 培養(yǎng)基
        2.1.4 基因引物
        2.1.5 引物合成和DNA測(cè)序
    2.2 儀器設(shè)備
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 △KAT2/MIRK基因的克隆
        2.3.2 電生理表達(dá)載體構(gòu)建
        2.3.3 體外反轉(zhuǎn)錄及純化
        2.3.4 電生理實(shí)驗(yàn)
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 △KAT2/MIRK基因的構(gòu)建
        2.4.2 電生理表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.4.3 DNA Linear的結(jié)果
        2.4.4 電生理結(jié)果分析
    2.5 討論
第三章 甜瓜鉀離子通道基因MIRK和△KAT2/MIRK的轉(zhuǎn)化
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 培養(yǎng)基配制方法
        3.1.4 儀器設(shè)備
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 植物表達(dá)載體構(gòu)建
        3.2.2 擬南芥的種植和管理
        3.2.3 擬南芥的轉(zhuǎn)化
        3.2.4 轉(zhuǎn)基因植株的PCR檢測(cè)
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 目的片段的獲得
        3.3.2 構(gòu)建PHB-Flag-MIRK/△KAT2/MIRK的過量表達(dá)質(zhì)粒
        3.3.3 農(nóng)桿菌陽性檢測(cè)
        3.3.4 擬南芥的種植
        3.3.5 轉(zhuǎn)基因植株的獲得
    3.4 討論
第四章 轉(zhuǎn)甜瓜基因的耐鹽性研究
    4.1 材料與試劑
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 鹽脅迫對(duì)種子根系生長的影響
        4.2.2 鹽脅迫下轉(zhuǎn)基因植株生長的影響
        4.2.3 葉綠素含量、植株生物量和Na+/K+含量的測(cè)定
        4.2.4 數(shù)據(jù)處理
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 表型的觀察
        4.3.2 鹽處理對(duì)植株離子含量的影響
        4.3.3 鹽處理對(duì)葉片葉綠素的影響
        4.3.4 植株生物量的測(cè)定
    4.4 討論
第五章 總結(jié)與展望
    5.1 總結(jié)
    5.2 本研究的創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間已發(fā)表或錄用的論文



本文編號(hào)：3826119