土壤鹽漬化是一個世界性問題,已經(jīng)嚴重制約作物的生長和發(fā)育。培育優(yōu)良的耐鹽作物品系是改善這一現(xiàn)象的有效途徑。甜瓜(Cucumis melo L.)是世界上經(jīng)濟價值很高的園藝作物,具有相對較強的耐鹽性,可以成為培育新型耐鹽作物的研究資源。植物對于鹽脅迫響應和抵抗是極其復雜的過程。土壤中高濃度的鹽分會導致植物根部產(chǎn)生滲透脅迫,影響植物對于鉀離子的吸收,致使K⁺/Na⁺的下降,導致植物體內(nèi)的正常代謝受到破壞。鉀離子通道是調節(jié)鉀元素吸收和轉運的最主要的方式,推測其應該參與了植物的耐鹽性調控。MIRK(Melon Inward Rectifying K⁺Channel,Gene Bank accession number:DQ116940)是本課題組前期從網(wǎng)紋甜瓜“春麗”中克隆的一個K⁺通道基因,并且將其表達到非洲爪蟾卵母(Xenopus oocytes)細胞后發(fā)現(xiàn)介導鉀離子流時受到了外源Na⁺的抑制作用,并且Na⁺對MIRK的抑制作用可能是由于MIRK氨基酸序列中的...

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 我國土壤鹽漬化現(xiàn)狀
    1.2 植物耐鹽機理的研究進展
        1.2.1 植物避鹽機理
        1.2.2 滲透調節(jié)機理
        1.2.3 活性氧清除機理
        1.2.4 鹽分區(qū)域化機理
    1.3 鉀離子通道基因的研究現(xiàn)狀
        1.3.1 離子通道的特性
        1.3.2 鉀離子通道的分類
        1.3.3 植物中鉀離子通道相關基因的研究
    1.4 鉀離子通道耐鹽性的研究以及植物基因轉化技術
        1.4.1 鉀離子通道與適應鹽脅迫
        1.4.2 植物基因轉化技術研究
    1.5 甜瓜與耐鹽性及甜瓜MIRK基因的研究進展
        1.5.1 甜瓜與耐鹽性
        1.5.2 甜瓜MIRK基因的研究進展
    1.6 本研究的目的意義
    1.7 研究內(nèi)容、研究方法和技術路線
        1.7.1 研究的主要內(nèi)容
        1.7.2 研究方法
        1.7.3 技術路線
第二章 甜瓜鉀離子通道基因MIRK人工改造基因的構建及電生理檢測
    2.1 材料與試劑
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 培養(yǎng)基
        2.1.4 基因引物
        2.1.5 引物合成和DNA測序
    2.2 儀器設備
    2.3 實驗方法
        2.3.1 △KAT2/MIRK基因的克隆
        2.3.2 電生理表達載體構建
        2.3.3 體外反轉錄及純化
        2.3.4 電生理實驗
    2.4 結果與分析
        2.4.1 △KAT2/MIRK基因的構建
        2.4.2 電生理表達載體的構建
        2.4.3 DNA Linear的結果
        2.4.4 電生理結果分析
    2.5 討論
第三章 甜瓜鉀離子通道基因MIRK和△KAT2/MIRK的轉化
    3.1 實驗材料與試劑
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗試劑
        3.1.3 培養(yǎng)基配制方法
        3.1.4 儀器設備
    3.2 實驗方法
        3.2.1 植物表達載體構建
        3.2.2 擬南芥的種植和管理
        3.2.3 擬南芥的轉化
        3.2.4 轉基因植株的PCR檢測
    3.3 結果與分析
        3.3.1 目的片段的獲得
        3.3.2 構建PHB-Flag-MIRK/△KAT2/MIRK的過量表達質粒
        3.3.3 農(nóng)桿菌陽性檢測
        3.3.4 擬南芥的種植
        3.3.5 轉基因植株的獲得
    3.4 討論
第四章 轉甜瓜基因的耐鹽性研究
    4.1 材料與試劑
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 實驗試劑
        4.1.3 實驗設備
    4.2 試驗方法
        4.2.1 鹽脅迫對種子根系生長的影響
        4.2.2 鹽脅迫下轉基因植株生長的影響
        4.2.3 葉綠素含量、植株生物量和Na+/K+含量的測定
        4.2.4 數(shù)據(jù)處理
    4.3 結果與分析
        4.3.1 表型的觀察
        4.3.2 鹽處理對植株離子含量的影響
        4.3.3 鹽處理對葉片葉綠素的影響
        4.3.4 植株生物量的測定
    4.4 討論
第五章 總結與展望
    5.1 總結
    5.2 本研究的創(chuàng)新點
    5.3 展望
參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間已發(fā)表或錄用的論文



本文編號：3826119