花色的改良一直是植物學(xué)家和園藝學(xué)家關(guān)注的重點(diǎn),其中類黃酮是影響花色形成最主要的物質(zhì)。類黃酮是植物體內(nèi)一類重要的次生代謝產(chǎn)物,其合成途徑受由MYB蛋白、bHLH蛋白以及WD40蛋白形成的MBW復(fù)合物的調(diào)控。針對(duì)于調(diào)控類黃酮合成的bHLH蛋白的研究雖然在幾種不同物種中已有報(bào)道,但是其功能分化及作用方式卻非常復(fù)雜,對(duì)其研究也不是十分清晰,且這些研究大多集中于雙子葉植物,而對(duì)于單子葉植物的研究卻寥寥無幾。香雪蘭(Fressia hybrida),鳶尾科香雪蘭屬多年生球根草本花卉,世界十大切花之一,顏色豐富艷麗,是研究花色的良好材料。本研究選取紅花香雪蘭為實(shí)驗(yàn)材料,克隆出兩個(gè)參與調(diào)控類黃酮合成的bHLH轉(zhuǎn)錄因子基因,分別命名為FhGL3L和FhTT8L。通過生物信息學(xué)分析、轉(zhuǎn)基因擬南芥分析和原生質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)等,對(duì)其基因功能進(jìn)行了詳細(xì)的解析。主要研究方法及具體研究結(jié)果如下:1.FhGL3L和FhTT8L的克隆及生物信息學(xué)分析根據(jù)香雪蘭轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果,通過RACE方法成功克隆到香雪蘭FhGL3L和FhTT8L的全長cDNA序列。Fh GL3L序列長度為2437bp,開放閱讀框?yàn)?061bp,編碼...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
    1.顏色產(chǎn)生的機(jī)制
    2.影響花色形成的因素
        2.1 影響花色形成的色素類物質(zhì)
        2.2 影響花色形成的其它因素
    3.類黃酮合成途徑及關(guān)鍵基因
        3.1 類黃酮合成途徑及關(guān)鍵酶
        3.2 類黃酮合成相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子
    4.調(diào)控類黃酮合成的bHLH轉(zhuǎn)錄因子
    5.本研究目的意義與內(nèi)容
材料與方法
    1.實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 植物材料及培養(yǎng)方法
        1.2 質(zhì)粒及菌種
        1.3 主要試劑
        1.4 主要試劑配制方法
        1.5 主要儀器設(shè)備
        1.6 引物合成
    2.實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 基因克隆
        2.2 生物信息學(xué)分析
        2.3 花色苷及原花青素相對(duì)含量測(cè)定
        2.4 轉(zhuǎn)化擬南芥及轉(zhuǎn)基因植株篩選
        2.5 Real Time-qPCR及基因表達(dá)量分析
        2.6 原生質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
結(jié)果及分析
    1.兩個(gè)香雪蘭bHLH轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆及生物信息學(xué)分析
        1.1 FhbHLHs基因的克隆
        1.2 FhbHLHs的生物信息學(xué)分析
    2.FhbHLHs基因表達(dá)模式與香雪蘭花色苷及原花青素（PAs）積累模式相關(guān)性分析
        2.1 紅花、白花香雪蘭盛開時(shí)期花朵總花色苷含量測(cè)定
        2.2 紅花香雪蘭花朵發(fā)育不同時(shí)期花色苷及原花青素積累模式分析
        2.3 紅花香雪蘭不同組織花色苷及原花青素積累模式分析
        2.4 FhTT8L和FhGL3L基因在紅花香雪蘭中表達(dá)模式分析
    3.過量表達(dá)FhGL3L基因影響擬南芥花色苷積累及擬南芥葉片表面表皮毛發(fā)生
        3.1 過量表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2 植物轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)基因陽性植株的篩選
        3.3 過量表達(dá)FhGL3L基因影響擬南芥花色苷積累
        3.4 過量表達(dá)FhGL3L基因影響擬南芥莖和葉面表皮毛發(fā)生
    4.瞬時(shí)表達(dá)FhTT8L影響擬南芥花色苷及原花青素合成相關(guān)結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)
        4.1 瞬時(shí)表達(dá)載體的構(gòu)建及質(zhì)粒的大量提取
        4.2 瞬時(shí)表達(dá)FhTT8L及Real time-qPCR分析
    5.FhTT8L、FhGL3L與AtMYBs互作
        5.1 FhTT8L和FhGL3L轉(zhuǎn)錄激活能力驗(yàn)證
        5.2 FhTT8L、FhGL3L與AtMYBs互作驗(yàn)證
    6.FhTT8L、FhGL3L與AtPAP1共轉(zhuǎn)啟動(dòng)AtDFR的表達(dá)
    7.FhGL3L激活能力的喪失導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因擬南芥表皮毛的缺失
    8.FhTT8L、FhGL3L截短區(qū)域功能驗(yàn)證
        8.1 載體構(gòu)建及激活能力驗(yàn)證
        8.2 FhbHLHs N端保守結(jié)構(gòu)域MIR與MYB互作
        8.3 C端結(jié)構(gòu)域參與形成同源二聚體
討論
    1.FhGL3L和FhTT8L是香雪蘭中的兩個(gè)bHLHs轉(zhuǎn)錄因子
    2.FhGL3L和FhTT8L參與調(diào)控類黃酮物質(zhì)的合成
    3.過表達(dá)FhGL3L抑制擬南芥莖與葉面表皮毛發(fā)生
    4.FhGL3L和FhTT8L在轉(zhuǎn)基因擬南芥中的作用模式
結(jié)論與創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3813118