插入位點(diǎn)分析對(duì)于金針菇功能基因組學(xué)的研究極為重要,分析方法常用反向PCR、熱不對(duì)稱交錯(cuò)PCR、Tail-PCR、染色體步移等,存在操作復(fù)雜、消耗時(shí)間長、特異性較差、效率低等缺點(diǎn)。近年來開始應(yīng)用基因組重測序的方法,對(duì)轉(zhuǎn)化子逐一測序與分析,工作量較大、費(fèi)用較高。本研究應(yīng)用矩陣設(shè)計(jì),把多個(gè)轉(zhuǎn)化子的DNA混合構(gòu)成樣品池,重測序后分析插入位點(diǎn),M個(gè)樣品池的測序數(shù)據(jù)可分析M×(M+1)/2個(gè)轉(zhuǎn)化子的插入位點(diǎn)。應(yīng)用矩陣設(shè)計(jì)構(gòu)建6個(gè)樣品池檢測21個(gè)轉(zhuǎn)化子,獲得21個(gè)插入位點(diǎn),表明這種方法可行、適合大樣本分析,如突變體庫。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 供試菌株
    1.2 DNA提取與PCR檢測
    1.3 矩陣設(shè)計(jì)樣品池
    1.4 基因組重測序
    1.5 插入位點(diǎn)分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 DNA樣品檢測與轉(zhuǎn)化子鑒定
    2.2 插入位點(diǎn)分析
    2.3 插入位點(diǎn)PCR驗(yàn)證
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