以虎奶菇菌絲為材料,提取、鑒定了虎奶菇錳超氧化物歧化酶,克隆虎奶菇錳超氧化物歧化酶基因。用液氮研磨、超聲、硫酸銨沉淀和透析等方法提取虎奶菇Mn-SOD; WST-8法測定虎奶菇Mn-SOD酶活力; H₂O₂鑒定虎奶菇SOD的類型;用同源克隆、cDNA末端快速擴增技術(shù)和融合引物與巢式PCR等方法從虎奶菇中克隆錳超氧化物歧化酶基因。結(jié)果表明,虎奶菇Mn-SOD酶活力為1.66個酶活力單位。酶經(jīng)過H₂O₂處理后仍然有活性,與未處理無明顯差異,表明虎奶菇中SOD主要是Mn-SOD�？寺～@得了虎奶菇錳超氧化物歧化酶基因PtMn-SOD,其DNA序列全長1025 bp,開放閱讀框全長為663 bp,編碼220個氨基酸。序列分析與系統(tǒng)進化樹表明,PtMn-SOD與屬于側(cè)耳屬的糙皮側(cè)耳(登錄號:MH645359.1)關(guān)系較近。預(yù)測該蛋白質(zhì)分子量為24.54 kDa,蛋白等電點為7.86。PtMn-SOD蛋白定位于線粒體,在線粒體中發(fā)揮功效。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料與儀器
    1.2 實驗方法
        1.2.1 虎奶菇Mn-SOD的提取及鑒定
            1.2.1. 1 虎奶菇Mn-SOD的提取
            1.2.1. 2 虎奶菇Mn-SOD的酶活力測定
            1.2.1. 3 虎奶菇Mn-SOD的鑒定
        1.2.2 虎奶菇Mn-SOD基因的克隆
            1.2.2. 1 基因組DNA的提取
            1.2.2. 2 總RNA的提取和cDNA第一條鏈的合成
            1.2.2. 3 虎奶菇Mn-SOD基因cDNA保守片段的克隆
            1.2.2. 4 虎奶菇Mn-SOD基因3'端cDNA片段的克隆
            1.2.2. 5 虎奶菇Mn-SOD基因5'端DNA片段的克隆
            1.2.2. 6 虎奶菇Mn-SOD基因的克隆
        1.2.3 虎奶菇Mn-SOD基因的生物信息學(xué)分析
            1.2.3. 1 虎奶菇Mn-SOD基因序列的生物信息學(xué)分析
            1.2.3. 2 虎奶菇Mn-SOD基因編碼蛋白的生物信息學(xué)分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 虎奶菇Mn-SOD提取及鑒定
        2.1.1 虎奶菇Mn-SOD提取
        2.1.2 虎奶菇Mn-SOD酶活的測定
        2.1.3 虎奶菇Mn-SOD的鑒定
    2.2 虎奶菇Mn-SOD基因的克隆
    2.3 虎奶菇Mn-SOD基因的生物信息學(xué)分析
        2.3.1 虎奶菇Mn-SOD基因序列的生物信息學(xué)分析
        2.3.2 虎奶菇Mn-SOD基因編碼蛋白的生物信息學(xué)分析
3 結(jié)論



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