山楂(Crataegus spp.),又稱山里紅,是薔薇科(Rosaceae)中一種重要的落葉小喬木。山楂果實(shí)發(fā)育中最重要的一個過程是山楂果核的硬化,這與木質(zhì)素的沉積有關(guān)。山楂種核被一層堅(jiān)硬的、木質(zhì)化的核皮(內(nèi)果皮)所包裹,這影響其食用價(jià)值,也是加工過程中的一個難題。在我國山楂資源中,有一種非常重要的軟核山楂資源,其果核質(zhì)軟,內(nèi)果皮呈現(xiàn)半木質(zhì)化,可隨果肉一同食用。為探討軟核山楂形成的分子機(jī)制,本研究分別以硬核山楂和軟核山楂為試材,通過高通量測序,篩選出MYB46基因,探究其與木質(zhì)素合成的關(guān)系。主要研究如下：1.通過分析山楂轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù),篩選出被注釋為MYB46轉(zhuǎn)錄因子的兩個山楂基因,8_Unigene_BMK.95O3和8_Unigene_BMK.10344。分別從硬核山楂和軟核山楂中挑選兩個品種,以花后18d～30d的山楂果實(shí)為試材,利用qRT-PCR技術(shù)對上述兩個基因的表達(dá)進(jìn)行基因驗(yàn)證,表明8_Unigene_BMK.9503基因在硬核山楂中的表達(dá)量要明顯的高于...

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 木質(zhì)素的組成與分布及生物合成途徑簡介
    1.2 轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控著植物木質(zhì)素生物合成的途徑
        1.2.1 MYB型轉(zhuǎn)錄因子對木質(zhì)素合成的影響
        1.2.2 NAC轉(zhuǎn)錄因子對木質(zhì)素生物合成的調(diào)控
        1.2.3 其他轉(zhuǎn)錄因子對木質(zhì)素合成的調(diào)控
    1.3 本研究目的意義
2 材料與方法
    2.1 植物材料
    2.2 菌株與試劑
        2.2.1 菌株
        2.2.2 試劑
    2.3 培養(yǎng)基
    2.4 試驗(yàn)方法
        2.4.1 山楂葉片和果實(shí)的總RNA的提取與檢測
        2.4.2 MYB46基因的克隆
        2.4.3 實(shí)時(shí)定量PCR
        2.4.4 農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化擬南芥及蘋果‘GL-3’組培苗
    2.5 木質(zhì)素含量的測定
3 結(jié)果與分析
    3.1 軟核山楂和硬核山楂中MYB46基因轉(zhuǎn)錄水平分析
    3.2 山楂CpMYB46基因全長克隆與分析
        3.2.1 山楂嫩葉RNA質(zhì)量及完整性分析
        3.2.2 PCR擴(kuò)增結(jié)果
        3.2.3 軟核山楂與硬核山楂中CpMYB46基因CDS序列分析
    3.3 山楂CpMYB46基因的功能驗(yàn)證
        3.3.1 CpMYB46過量表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.3.2 CpMYB46基因在擬南芥中的異位表達(dá)
        3.3.3 CpMYB46基因在蘋果中的異位表達(dá)
4 討論
    4.1 MYB46的功能
    4.2 MYB46基因序列差異對其功能的影響
    4.3 木質(zhì)素含量對植物表型的影響
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號：3746282