春化是大白菜[Brassica campestris L.ssp.pekinensis（Lour.）Olsson]開(kāi)花途徑中一個(gè)重要的階段,大白菜需要一定的低溫誘導(dǎo)才能從營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)轉(zhuǎn)變?yōu)樯成L(zhǎng),進(jìn)而抽薹開(kāi)花。在春化過(guò)程中有一系列基因發(fā)揮著作用,共同調(diào)節(jié)植物的開(kāi)花進(jìn)程。本試驗(yàn)所研究的未知基因Bra028171是本實(shí)驗(yàn)室前期的一個(gè)研究中,經(jīng)過(guò)春化處理后發(fā)生甲基化變化的一個(gè)基因,Bra028171位于大白菜第4號(hào)染色體上。Bra028171的長(zhǎng)度為786bp,是一段保守序列,該基因在擬南芥中有同源基因At5g38320,該基因功能同樣未知。本試驗(yàn)通過(guò)克隆該基因,研究其亞細(xì)胞定位,探究此基因的表達(dá)模式以及構(gòu)建了超表達(dá)和RNAi載體并轉(zhuǎn)化到模式植物擬南芥中來(lái)初步分析此基因的功能,進(jìn)而摸索探究該基因在大白菜春化過(guò)程中所發(fā)揮的作用。為大白菜抽薹開(kāi)花的進(jìn)程提供參考,同時(shí)為預(yù)防大白菜未熟抽薹的現(xiàn)象提供理論依據(jù)。試驗(yàn)結(jié)果歸納如下:（1）通過(guò)對(duì)Bra028171的序列分析,我們發(fā)現(xiàn)該基因在擬南芥中有一個(gè)同源基因At5g38320,該基因同樣是未知基因。通過(guò)對(duì)Bra028171的生物信息學(xué)分析,我們得到了一些... 

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 研究的目的與意義
    1.2 國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展
        1.2.1 大白菜春化作用的特點(diǎn)
        1.2.2 高等植物成花的分子調(diào)控途徑
        1.2.3 Bra028171的來(lái)源
    1.3 本實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 細(xì)菌植株和質(zhì)粒載體
        2.1.3 主要試劑和試劑盒
        2.1.4 主要試驗(yàn)儀器和器材
        2.1.5 試驗(yàn)所需軟件
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 Bra028171基因的克隆
        2.2.2 Bra028171實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析
        2.2.3 Bra028171基因的亞細(xì)胞定位
        2.2.4 Bra028171基因表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.5 重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
        2.2.6 農(nóng)桿菌花序侵染法轉(zhuǎn)化
        2.2.7 抗性植株的分子及形態(tài)學(xué)鑒定
3 結(jié)果與分析
    3.1 Bra028171基因的克隆
        3.1.1 大白菜DNA的提取
        3.1.2 目的片段的獲得與測(cè)序
    3.2 Bra028171生物信息學(xué)分析
        3.2.1 Bra028171序列分析
        3.2.2 Bra028171順式作用元件分析
    3.3 Bra028171表達(dá)模式的分析
        3.3.1 大白菜總RNA的提取
        3.3.2 Bra028171在不同部位的表達(dá)分析
        3.3.3 不同春化時(shí)間下Bra028171的表達(dá)量
    3.4 Bra028171亞細(xì)胞定位分析
    3.5 Bra028171植物表達(dá)載體的構(gòu)建和農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
        3.5.1 Bra028171超表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.5.2 Bra028171RNAi載體的構(gòu)建
        3.5.3 植物表達(dá)載體的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
    3.6 Bra028171植物表達(dá)載體對(duì)擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化
        3.6.1 T1代轉(zhuǎn)基因擬南芥的篩選
        3.6.2 轉(zhuǎn)基因植株的分子檢測(cè)
        3.6.3 轉(zhuǎn)基因擬南芥T2代的獲得及表型分析與鑒定
4 討論
    4.1 Bra028171的序列分析
    4.2 Bra028171表達(dá)模式分析
    4.3 Bra028171亞細(xì)胞定位分析
    4.4 Bra028171植物表達(dá)載體的構(gòu)建和擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化
    4.5 本研究的創(chuàng)新與不足
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]植物細(xì)胞中瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)的建立及研究進(jìn)展[J]. 周丹丹,俞嘉寧.  中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào). 2013(24)
[4]植物開(kāi)花調(diào)控機(jī)理研究進(jìn)展[J]. 李朝煒,朱昀.  生物學(xué)教學(xué). 2011(06)
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[7]高等植物開(kāi)花誘導(dǎo)研究進(jìn)展[J]. 孫昌輝,鄧曉建,方軍,儲(chǔ)成才.  遺傳. 2007(10)
[8]植物開(kāi)花時(shí)間調(diào)控的信號(hào)途徑[J]. 曾群,趙仲華,趙淑清.  遺傳. 2006(08)
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[10]用綠色熒光蛋白和洋蔥表皮細(xì)胞檢測(cè)擬南芥rd29A基因啟動(dòng)子活性的方法[J]. 張俊蓮,王蒂,張金文,陳正華.  植物生理學(xué)通訊. 2005(06)

碩士論文
[1]FT基因在桑樹(shù)生長(zhǎng)狀態(tài)轉(zhuǎn)變中的表達(dá)分析[D]. 劉立群.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2014
[2]連續(xù)春化繁殖導(dǎo)致大白菜冬性減弱的分子機(jī)理初探[D]. 王曉麗.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[3]小黑楊FT-like基因的克隆、原核表達(dá)及植物超表達(dá)、RNAi表達(dá)載體的構(gòu)建[D]. 王沙沙.東北林業(yè)大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3723001