溪蓀（Iris sanguinea）與玉蟬花（I.ensata）是鳶尾科鳶尾屬中非常耐寒的多年生草本植物,其花型奇特,觀賞價值極高,在北方地區(qū)有著廣闊的應(yīng)用前景,為了今后開展基因工程育種,本課題組前期已開展了這兩個種的組培體系構(gòu)建,但在基因工程育種中高效的組培體系更有利于提高轉(zhuǎn)基因材料的分化率,故本研究又嘗試采用不同的外植體材料構(gòu)建愈傷誘導(dǎo)率和分化率都比較高的組培體系,并嘗試進(jìn)行其遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立,研究成果可為將來的分子育種工作奠定基礎(chǔ)。主要研究成果如下:1.建立以玉蟬花根段為外植體的高效組培體系:選擇成熟的玉蟬花種子,種子消毒后剝除種皮,將處理好的種子接入固體培養(yǎng)基MS+3.5 g/L瓊脂中培養(yǎng)20d,獲得無菌幼苗。將長有3-4片葉的幼苗接入固體培養(yǎng)基MS+活性炭1.0 g/L+4.0 g/L瓊脂,培養(yǎng)20-25d,選擇不定根中間帶有幼嫩須根的部位作為外植體,須根切口處產(chǎn)生愈傷組織。愈傷誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為 MS+6-BA 1.0 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+7.0 g/L瓊脂,誘導(dǎo)率為100.00%;愈傷增殖的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA0.2 ... 

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 鳶尾屬植物組織培養(yǎng)研究進(jìn)展
        1.1.1 組織培養(yǎng)組培途徑
        1.1.2 組織培養(yǎng)組培影響因素
    1.2 單子葉植物遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)研究進(jìn)展
        1.2.1 單子葉植物遺傳轉(zhuǎn)化概況
        1.2.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化體系影響因素
    1.3 溪蓀和玉蟬花研究現(xiàn)狀
    1.4 本研究目的與意義
2 玉蟬花根段組織培養(yǎng)體系的建立
    2.1 試驗材料
    2.2 試驗方法
        2.2.1 無菌幼苗的獲取
        2.2.2 外植體的獲取
        2.2.3 愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基的篩選
        2.2.4 愈傷增殖培養(yǎng)基的篩選
        2.2.5 抑制愈傷增殖的內(nèi)生菌污染
        2.2.6 不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的篩選
        2.2.7 生根培養(yǎng)
        2.2.8 無菌苗移栽成活
        2.2.9 數(shù)據(jù)分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 不同瓊脂量對玉蟬花生根的影響
        2.3.2 不同激素組合對愈傷誘導(dǎo)的影響
        2.3.3 不同激素配比對愈傷增殖的影響
        2.3.4 不同抑菌劑對愈傷增殖的內(nèi)生菌污染抑制效果
        2.3.5 不同外源激素組合對分化不定芽的影響
        2.3.6 添加活性炭及生長素NAA對生根的影響
        2.3.7 組培苗的煉苗及移栽
    2.4 本章小節(jié)
3 溪蓀組織培養(yǎng)體系的建立
    3.1 試驗材料
    3.2 試驗方法
        3.2.1 外植體的獲取
        3.2.2 愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基的篩選
        3.2.3 愈傷增殖及抑制愈傷增殖的內(nèi)生菌污染
        3.2.4 不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的篩選
        3.2.5 生根培養(yǎng)
        3.2.6 無菌苗移栽成活
        3.2.7 數(shù)據(jù)分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 外植體對愈傷誘導(dǎo)率的影響
        3.3.2 愈傷增殖及抑菌劑對愈傷增殖的內(nèi)生菌污染抑制效果
        3.3.3 不同激素組合對誘導(dǎo)不定芽的影響
        3.3.4 生根培養(yǎng)
        3.3.5 組培苗的煉苗及移栽
    3.4 本章小節(jié)
4 兩種鳶尾遺傳轉(zhuǎn)化體系的初探
    4.1 試驗材料
        4.1.1 受體材料
        4.1.2 菌株
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 培養(yǎng)基
    4.2 試驗方法
        4.2.1 侵染材料的準(zhǔn)備
        4.2.2 農(nóng)桿菌侵染工作菌液的準(zhǔn)備
        4.2.3 適合根段誘導(dǎo)愈傷的Carb濃度篩選
        4.2.4 適宜愈傷分化不定芽的Kana濃度篩選
        4.2.5 農(nóng)桿菌介導(dǎo)侵染時間及共培養(yǎng)時間的篩選
        4.2.6 GUS化學(xué)組織染色檢測
        4.2.7 數(shù)據(jù)分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 侵染后根段誘導(dǎo)愈傷的適宜Carb濃度的確定
        4.3.2 Kana濃度對愈傷分化的影響
        4.3.3 菌液侵染時間及共培養(yǎng)時間對誘導(dǎo)效率的影響
        4.3.4 GUS染色檢測結(jié)果
    4.4 本章小節(jié)
5 討論
    5.1 兩種鳶尾組織培養(yǎng)體系的建立
    5.2 影響兩種鳶尾遺傳轉(zhuǎn)化體系建立的因素
6 結(jié)論與建議
    6.1 結(jié)論
    6.2 建議
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3719463