本論文是基于對300多份番茄重測序材料接種灰霉菌,將其病斑面積與測序結(jié)果進行GWAS（Genome-wide association study）關(guān)聯(lián)分析,候選出抗性基因。對初步候選的基因進行遺傳轉(zhuǎn)化,并對轉(zhuǎn)化植株進行多次重復(fù)接病處理后,篩選出穩(wěn)定抗性或感性基因,同時對其功能進行了鑒定。初步結(jié)果如下:1.對GWAS候選基因的T0代超量轉(zhuǎn)基因材料進行接種鑒定,初步篩選出相對于對照偏感或偏抗的候選基因材料。2.對候選基因的T1、T2代進行重復(fù)抗性鑒定,進一步篩選出穩(wěn)定抗、感材料GW13以及GW9。與對照相比,GW13超量表達植株表現(xiàn)偏抗的表型,而GW9超量表達植株表現(xiàn)出偏感的表型,其他方面并無明顯差異的表型。3.分別分析GW9以及GW13兩個基因在A57中受灰霉菌的誘導(dǎo)程度,結(jié)果表明兩個基因在對灰霉菌較抗的TS材料中表達量均不同程度的提高,而在對灰霉菌較感的TS材料中表達量均不同程度的下降,說明兩個基因都受到灰霉菌的誘導(dǎo)表達,但是具體機制并不清楚。4.對GW9和GW13兩個基因SNP位點分析發(fā)現(xiàn),在不同的抗感TS材料中,GW13編碼框內(nèi)有一個SNP位點的差異。GW9的編碼框內(nèi)并沒有檢測到S... 

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表
1.前言
    1.1 研究課題的由來
    1.2 文獻綜述
        1.2.1 植物免疫
        1.2.2 細胞自噬與植物免疫
        1.2.3 活性氧在植物抗性中的作用
        1.2.4 MAPK級聯(lián)反應(yīng)在植物體抗病過程中的作用
        1.2.5 銅胺氧化酶概述
        1.2.6 腺苷酸激酶概述
    1.3 研究目的與意義
2.材料與方法
    2.1 植物材料
    2.2 菌株及載體
    2.3 實驗用工具酶、試劑盒及試劑
    2.4 轉(zhuǎn)基因材料的抗性鑒定
        2.4.1 灰霉菌的保存與孢子制備
        2.4.2 轉(zhuǎn)基因植株的抗性鑒定
        2.4.3 病斑面積統(tǒng)計
    2.5 候選基因的功能鑒定
        2.5.1 GWAS候選基因?qū)颐咕剐缘闹貜?fù)鑒定
        2.5.2 干涉載體的構(gòu)建
        2.5.3 干涉載體的遺傳轉(zhuǎn)化
        2.5.4 T0代干涉植株陽性檢測
        2.5.5 T0代轉(zhuǎn)基因植株表達量檢測
        2.5.6 SNP位點的鑒定
        2.5.7 灰霉菌誘導(dǎo)表達譜
        2.5.8 基因在激素突變體中的表達量檢測
        2.5.9 抗性途徑標(biāo)記基因的表達量檢測
        2.5.10 GW9釣餌載體的構(gòu)建
        2.5.11 單克隆測序?qū)Ρ确治龌プ骱蜻x基因
        2.5.12 酵母雙雜點對點互作驗證
        2.5.13 過氧化氫原位檢測（DAB染色）
3 結(jié)果與分析
    3.1 GWAS候選基因的載體構(gòu)建以及轉(zhuǎn)基因材料的獲得
    3.2 GWAS候選基因的抗性鑒定
        3.2.1 GW9轉(zhuǎn)基因植株抗性鑒定及結(jié)果分析
        3.2.2 GW13轉(zhuǎn)基因植株的抗性鑒定及結(jié)果分析
    3.3 轉(zhuǎn)基因T0代植株表達量檢測
    3.4 基因的功能鑒定
        3.4.1 GW9及GW13基因的結(jié)構(gòu)分析
        3.4.2 灰霉菌誘導(dǎo)表達譜
        3.4.3 基因在激素突變體中的表達量檢測
        3.4.4 GW9、GW13轉(zhuǎn)基因材料中抗性標(biāo)記基因的表達量分析
        3.4.5 SNP位點的鑒定
        3.4.6 GW9酵母雙雜結(jié)果分析
        3.4.7 活性氧的檢測
4.討論
    4.1 GW9功能鑒定結(jié)果與討論
    4.2 GW13功能鑒定結(jié)果與討論
    4.3 實驗后續(xù)工作預(yù)想
        4.3.1 關(guān)于GW9后續(xù)工作的設(shè)想
        4.3.2 關(guān)于GW13后續(xù)工作的設(shè)想
參考文獻
附錄
致謝



本文編號：3694721