發(fā)布時(shí)間：2022-10-20 14:40

　　本論文是基于對(duì)300多份番茄重測(cè)序材料接種灰霉菌,將其病斑面積與測(cè)序結(jié)果進(jìn)行GWAS（Genome-wide association study）關(guān)聯(lián)分析,候選出抗性基因。對(duì)初步候選的基因進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化,并對(duì)轉(zhuǎn)化植株進(jìn)行多次重復(fù)接病處理后,篩選出穩(wěn)定抗性或感性基因,同時(shí)對(duì)其功能進(jìn)行了鑒定。初步結(jié)果如下:1.對(duì)GWAS候選基因的T0代超量轉(zhuǎn)基因材料進(jìn)行接種鑒定,初步篩選出相對(duì)于對(duì)照偏感或偏抗的候選基因材料。2.對(duì)候選基因的T1、T2代進(jìn)行重復(fù)抗性鑒定,進(jìn)一步篩選出穩(wěn)定抗、感材料GW13以及GW9。與對(duì)照相比,GW13超量表達(dá)植株表現(xiàn)偏抗的表型,而GW9超量表達(dá)植株表現(xiàn)出偏感的表型,其他方面并無(wú)明顯差異的表型。3.分別分析GW9以及GW13兩個(gè)基因在A57中受灰霉菌的誘導(dǎo)程度,結(jié)果表明兩個(gè)基因在對(duì)灰霉菌較抗的TS材料中表達(dá)量均不同程度的提高,而在對(duì)灰霉菌較感的TS材料中表達(dá)量均不同程度的下降,說(shuō)明兩個(gè)基因都受到灰霉菌的誘導(dǎo)表達(dá),但是具體機(jī)制并不清楚。4.對(duì)GW9和GW13兩個(gè)基因SNP位點(diǎn)分析發(fā)現(xiàn),在不同的抗感TS材料中,GW13編碼框內(nèi)有一個(gè)SNP位點(diǎn)的差異。GW9的編碼框內(nèi)并沒(méi)有檢測(cè)到S... 

【文章頁(yè)數(shù)】：50 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語(yǔ)表
1.前言
    1.1 研究課題的由來(lái)
    1.2 文獻(xiàn)綜述
        1.2.1 植物免疫
        1.2.2 細(xì)胞自噬與植物免疫
        1.2.3 活性氧在植物抗性中的作用
        1.2.4 MAPK級(jí)聯(lián)反應(yīng)在植物體抗病過(guò)程中的作用
        1.2.5 銅胺氧化酶概述
        1.2.6 腺苷酸激酶概述
    1.3 研究目的與意義
2.材料與方法
    2.1 植物材料
    2.2 菌株及載體
    2.3 實(shí)驗(yàn)用工具酶、試劑盒及試劑
    2.4 轉(zhuǎn)基因材料的抗性鑒定
        2.4.1 灰霉菌的保存與孢子制備
        2.4.2 轉(zhuǎn)基因植株的抗性鑒定
        2.4.3 病斑面積統(tǒng)計(jì)
    2.5 候選基因的功能鑒定
        2.5.1 GWAS候選基因?qū)颐咕剐缘闹貜?fù)鑒定
        2.5.2 干涉載體的構(gòu)建
        2.5.3 干涉載體的遺傳轉(zhuǎn)化
        2.5.4 T0代干涉植株陽(yáng)性檢測(cè)
        2.5.5 T0代轉(zhuǎn)基因植株表達(dá)量檢測(cè)
        2.5.6 SNP位點(diǎn)的鑒定
        2.5.7 灰霉菌誘導(dǎo)表達(dá)譜
        2.5.8 基因在激素突變體中的表達(dá)量檢測(cè)
        2.5.9 抗性途徑標(biāo)記基因的表達(dá)量檢測(cè)
        2.5.10 GW9釣餌載體的構(gòu)建
        2.5.11 單克隆測(cè)序?qū)Ρ确治龌プ骱蜻x基因
        2.5.12 酵母雙雜點(diǎn)對(duì)點(diǎn)互作驗(yàn)證
        2.5.13 過(guò)氧化氫原位檢測(cè)（DAB染色）
3 結(jié)果與分析
    3.1 GWAS候選基因的載體構(gòu)建以及轉(zhuǎn)基因材料的獲得
    3.2 GWAS候選基因的抗性鑒定
        3.2.1 GW9轉(zhuǎn)基因植株抗性鑒定及結(jié)果分析
        3.2.2 GW13轉(zhuǎn)基因植株的抗性鑒定及結(jié)果分析
    3.3 轉(zhuǎn)基因T0代植株表達(dá)量檢測(cè)
    3.4 基因的功能鑒定
        3.4.1 GW9及GW13基因的結(jié)構(gòu)分析
        3.4.2 灰霉菌誘導(dǎo)表達(dá)譜
        3.4.3 基因在激素突變體中的表達(dá)量檢測(cè)
        3.4.4 GW9、GW13轉(zhuǎn)基因材料中抗性標(biāo)記基因的表達(dá)量分析
        3.4.5 SNP位點(diǎn)的鑒定
        3.4.6 GW9酵母雙雜結(jié)果分析
        3.4.7 活性氧的檢測(cè)
4.討論
    4.1 GW9功能鑒定結(jié)果與討論
    4.2 GW13功能鑒定結(jié)果與討論
    4.3 實(shí)驗(yàn)后續(xù)工作預(yù)想
        4.3.1 關(guān)于GW9后續(xù)工作的設(shè)想
        4.3.2 關(guān)于GW13后續(xù)工作的設(shè)想
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號(hào)：3694721