發(fā)布時(shí)間：2022-10-18 15:54

　　轉(zhuǎn)錄因子在植物調(diào)控對(duì)外界病原菌侵染的免疫反應(yīng)中起重要作用。Trihelix轉(zhuǎn)錄因子,又稱為GT因子,是一類植物特有的轉(zhuǎn)錄因子類型,在調(diào)控植物表皮毛形態(tài)建成、胚胎和種子發(fā)育、花瓣發(fā)育分化及應(yīng)對(duì)各種非生物脅迫中起重要作用,但有關(guān)其在植物抗病反應(yīng)中的作用及其機(jī)制所知甚少。本研究中,我們采用病毒誘導(dǎo)的基因沉默（VIGS）方法對(duì)Trihelix轉(zhuǎn)錄因了家族基因逐一沉默,通過(guò)對(duì)各沉默植株接種灰霉菌（Botrytiscinerea）和番茄丁香假單胞菌番茄致病變種（Pseudomonassyringae pv.tomato DC3000,PstDC3000）來(lái)探索 Trihelix 轉(zhuǎn)錄因子家族基因在番茄應(yīng)對(duì)病原菌入侵時(shí)的抗病作用及其可能的機(jī)制。主要研究結(jié)果如下:（1）利用生物信息學(xué)方法在番茄數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索鑒定到36個(gè)Trihelix轉(zhuǎn)錄因子基因,克隆鑒定了其中的27個(gè)Trihelix轉(zhuǎn)錄因子基因。蛋白保守結(jié)構(gòu)域分析表明,絕大多數(shù)都含有至少一個(gè)MybDNA結(jié)合域。（2）熒光實(shí)時(shí)定量PCR分析表明,番茄Trihelix轉(zhuǎn)錄因子基因在B.cinerea和PstDC3000侵染后呈現(xiàn)不同程度的誘導(dǎo)表達(dá)模式,大... 

【文章頁(yè)數(shù)】：101 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述及研究背景
    1.1 植物先大免疫研究進(jìn)展
        1.1.1 PAMPs/MAMPs觸發(fā)的植物免疫(PTI)
        1.1.2 效應(yīng)子發(fā)的植物免疫(ETI)
    1.2 ROS在植物中的研究進(jìn)展
        1.2.1 ROS在植物中產(chǎn)生的來(lái)源
            1.2.1.1 ROS與植物信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
            1.2.1.2 ROS與植物NADPH氧化酶
        1.2.2 ROS與植物根發(fā)育
        1.2.3 ROS與植物免疫
    1.3 植物Trihelix轉(zhuǎn)錄因子家族的生物學(xué)功能及其研究進(jìn)展
        1.3.1 Trihelix轉(zhuǎn)錄因子的生化與結(jié)構(gòu)特征
        1.3.2 Trihelix轉(zhuǎn)錄因子家族及其特性
        1.3.3 Trihelix轉(zhuǎn)錄因子在植物生長(zhǎng)發(fā)育中的調(diào)控作用
        1.3.4 Trihelix轉(zhuǎn)錄因子在植物應(yīng)對(duì)非生物與生物脅迫反應(yīng)中的作用
    1.4 本研究的目的意義及主要內(nèi)容
        1.4.1 研究的目的意義
        1.4.2 研究的要內(nèi)容
第二章 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 植物培養(yǎng)與處理
        2.1.3 菌株與載體
        2.1.4 酶與各種生化試劑
        2.1.5 引物
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 Trihelix轉(zhuǎn)錄因子家族基因的鑒定與命名
        2.2.2 DNA序列的測(cè)定及比對(duì)分析
    2.3 基因cDNA克隆
    2.4 總RNA的提取與反轉(zhuǎn)錄
    2.5 熒光實(shí)時(shí)定量PCR(Real-timePCR)
    2.6 VIGS載體構(gòu)建和農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
    2.7 VIGS體系的構(gòu)建
    2.8 GFP過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建
    2.9 本氏煙瞬時(shí)表達(dá)體系的建立
    2.10 總蛋白的提取
    2.11 灰霉菌的培養(yǎng)
        2.11.1 灰霉菌接種處理
        2.11.2 灰霉菌病斑大小的統(tǒng)計(jì)
        2.11.3 灰霉菌菌量測(cè)定
    2.12 Pseudomonas syringae pv.tomato DC3000接種處理
    2.13 ROS的測(cè)定
    2.14 臺(tái)酚藍(lán)染色、DAB和NBT染色
    2.15 亞細(xì)胞定位
第三章 Trhelix轉(zhuǎn)錄因子家族基因的鑒定、表達(dá)模式分析及抗病功能研究
    3.1 Trhelix轉(zhuǎn)錄因子家族基因的鑒定和蛋白結(jié)構(gòu)域分析
        3.1.1 番茄Trihelix轉(zhuǎn)錄因子家族基因的克隆與鑒定
        3.1.2 番茄Trihelix轉(zhuǎn)錄因子家族蛋白結(jié)構(gòu)域分析
    3.2 Trihelix轉(zhuǎn)錄因子家族基因在灰霉菌和丁香假單胞菌番茄致病變種誘導(dǎo)下的表達(dá)分析
    3.3 Trhelix轉(zhuǎn)錄因子家族基因的抗病功能研究
        3.3.1 接種灰霉菌的病害表型及病原菌生物量
        3.3.2 本氏煙瞬時(shí)過(guò)表達(dá)4個(gè)Trihelix轉(zhuǎn)錄因子對(duì)灰霉菌的敏感性測(cè)定
        3.3.3 4個(gè)Trihelix轉(zhuǎn)錄因子家族基因接種PstDC3000的病害表型及病原菌生物量
    3.4 4個(gè)Trihelix轉(zhuǎn)錄因子家族基因的抗病機(jī)理分析
        3.4.1 SIGT7/SIGT13/SIGT14/SIGT15沉默植株在chitooctaose與flg22誘導(dǎo)下的ROS檢測(cè)
        3.4.2 SIGT7/SIGT13/SIGT14/SIGT15沉默植株在灰霉菌誘導(dǎo)下的過(guò)氧化氫與超氧陰離子積累情況
        3.4.3 SIGT7/SIGT13/SIGT14/SIGT15沉默植株在灰霉菌誘導(dǎo)時(shí)PR基因的表達(dá)分析
    3.5 SIGT7、SIGT13、SIGT14和SIGT15亞細(xì)胞定位
第四章 小結(jié)與討論
參考文獻(xiàn)
附錄 本文的引物序列


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]植物光信號(hào)傳導(dǎo)途徑中重要調(diào)控基因概述[J]. 丁超,張樹偉,王新勝,吳霞,楊帆,馬紀(jì)農(nóng),李燕娥,馬燕斌.  山西農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(12)



本文編號(hào)：3692614