在動(dòng)物及擬南芥基因組中,突觸結(jié)合蛋白基因（synaptotagmin,SYT）是作為含有C2結(jié)構(gòu)域的基因廣泛存在。目前已發(fā)現(xiàn)大量包含C2結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì),其中大多數(shù)參與細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)或膜轉(zhuǎn)運(yùn)。SYT都包含五個(gè)結(jié)構(gòu)域:囊泡內(nèi)N–端結(jié)構(gòu)域,跨膜結(jié)構(gòu)域,胞質(zhì)中C2A,C2B,C–端結(jié)構(gòu)域,其中C2A,C2B是行使功能的主要結(jié)構(gòu)域。擬南芥基因組中含有6個(gè)SYT同源基因,分別命名為SYTA–F。已報(bào)道擬南芥SYTA在擬南芥鹽脅迫應(yīng)答信號途徑中起著重要調(diào)節(jié)作用。近期研究表明擬南芥SYTA能與TMV的運(yùn)動(dòng)蛋白相互作用,在沉默SYTA的擬南芥中TMV運(yùn)動(dòng)蛋白的擴(kuò)散受到抑制。番茄作為茄科植物的代表,是研究蔬菜中果實(shí)發(fā)育和成熟過裎的典型植物。本研究以2012年完成的番茄基因組測序?yàn)榛A(chǔ),經(jīng)比對有SYTA同源基因存在。為了明確番茄中SYTA的亞細(xì)胞定位及篩選預(yù)期互作的寄主蛋白,本研究以室內(nèi)番茄幼苗為材料,克隆番茄SYTA同源基因,進(jìn)行植物表達(dá)分析,并且在茄科植物煙草cDNA文庫中用酵母雙雜交篩選互作基因,測序比對,發(fā)現(xiàn)SYTA可與煙草鐵氧還蛋白I（ferredoxin I,Fd–I）在酵母細(xì)胞內(nèi)直接互作。研究結(jié)... 

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.動(dòng)物SYTS功能研究進(jìn)展
        1.1 動(dòng)物SYT相關(guān)亞型分類
        1.2 Synaptotagmin基因家族結(jié)構(gòu)域
        1.3 SYT亞型亞細(xì)胞定位及組織分布
    2. 擬南芥SYT研究進(jìn)展
        2.1 擬南芥中不同亞型分類
        2.2 擬南芥SYTA功能研究
    3. 酵母雙雜交研究進(jìn)展
        3.1 經(jīng)典酵母雙雜交系統(tǒng)
        3.2 其他酵母雙雜交系統(tǒng)
        3.3 酵母雙雜交主要應(yīng)用
第二章 引言
第三章 番茄SYTA的克隆、分析和表達(dá)
    1.材料與方法
        1.1 試驗(yàn)時(shí)間與地點(diǎn)
        1.2 試驗(yàn)材料
        1.3 試驗(yàn)方法
    2.番茄SYTA克隆結(jié)果與分析
        2.1 番茄RNA提取
        2.2 番茄SYTA RT-PCR
        2.4 生物信息學(xué)分析
    3.番茄SYTA構(gòu)建至綠色熒光載體植物表達(dá)結(jié)果與分析
        3.1 番茄SYTA亞克隆
        3.2 重組植物表達(dá)載體pPZP–SYTA–GFP農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化及SYTA–GFP融合蛋白表達(dá)
    4.討論
第三章 番茄SYTA互作蛋白的篩選
    1.試驗(yàn)材料
    2.構(gòu)建誘餌表達(dá)載體PSTT91-SYTA
        2.1 番茄SYTA與pSTT91雙酶切
        2.2 重組載體連接
        2.3 電泳檢測
        2.4 質(zhì)粒提取
        2.5 番茄SYTA酵母雙雜交系統(tǒng)中自激活及毒性驗(yàn)證
        2.6 利用GAL-4 酵母雙雜交系統(tǒng)篩選煙草cDNA文庫
        2.7 X-gal藍(lán)斑實(shí)驗(yàn)分析篩選陽性克隆
        2.8 酵母L40感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.9 酵母雙雜交技術(shù)的操作步驟
    3 結(jié)果與分析
        3.1 酵母雙雜交誘餌表達(dá)載體pSTT91-SYTA的構(gòu)建
        3.2 番茄SYTA自激活驗(yàn)證
        3.3 誘餌酵母表達(dá)載體篩選煙草cDNA文庫
        3.4 篩庫陽性克隆的測序分析
        3.5 番茄SYTA與Fd I全長蛋白酵母雙雜交互作驗(yàn)證
    4.討論
第五章 結(jié)論與展望
    1.結(jié)論
    2.展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
在校期間發(fā)表論文及參加課題


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]普通煙草鐵氧還蛋白Ⅰ的原核表達(dá)、抗體制備及在ToMV侵染煙草體內(nèi)表達(dá)分析[J]. 孫現(xiàn)超,李勇,周常勇,青玲.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2010(19)
[2]麻疹病毒絨猴細(xì)胞受體基因的克隆及功能鑒定[J]. 李凌云,劉鑫,張鵬,齊義鵬,程明.  科學(xué)通報(bào). 2002(16)

碩士論文
[1]擬南芥synaptotagmin家族組織定位及非生物脅迫表達(dá)譜研究[D]. 田文鵬.蘭州大學(xué) 2011



本文編號：3690752