柿單寧屬縮合單寧（又稱“原花青素”）是柿果中大量積累的次生代謝產(chǎn)物,也是其產(chǎn)生澀感的主要原因。已知柿原花青素生物合成涉及多個(gè)結(jié)構(gòu)基因參與并受轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控。目前有關(guān)原花青素生物合成調(diào)控的報(bào)道,多集中在MYB、b HLH和WD40三類轉(zhuǎn)錄因子上,且以三元蛋白復(fù)合體MBW的形式調(diào)控原花青素合成相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。本研究以課題組前期通過轉(zhuǎn)錄組及蛋白質(zhì)組測序篩選獲得與中國甜柿可溶性單寧累積模式相關(guān)的MYB轉(zhuǎn)錄因子-Dk MYB15為研究對象,通過分析其在單寧累積中的作用及作用方式來探討其在中國甜柿原花青素生物合成的的調(diào)控作用,從而為高、低單寧含量的柿種質(zhì)創(chuàng)制提供科學(xué)依據(jù)。主要結(jié)果如下:1.Dk MYB15為R2R3-MYB轉(zhuǎn)錄因子,全長633 bp,編碼211個(gè)氨基酸,其C端含有保守的EAR抑制基序;系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示Dk MYB15與已報(bào)道的原花青素生物合成抑制子聚為一類,屬抑制型MYB轉(zhuǎn)錄因子。Dk MYB15在非完全甜柿和日本甜柿中表達(dá)量較低,而在中國甜柿果實(shí)發(fā)育中后期顯著上調(diào)表達(dá),與中國甜柿可溶性單寧的累積呈負(fù)相關(guān)。2.煙草亞細(xì)胞定位結(jié)果顯示Dk MYB15定位于細(xì)胞核;在活體柿葉片及柿果... 

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
1 前言
    1.1 課題的提出
    1.2 前人研究進(jìn)展
        1.2.1 柿原花青素研究進(jìn)展
        1.2.2 MYB轉(zhuǎn)錄因子與原花青素的合成
    1.3 研究目的和內(nèi)容
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 柿果單寧含量測定
        2.2.2 總RNA提取及c DNA合成
        2.2.3 實(shí)時(shí)定量PCR
        2.2.4 DkMYB15系統(tǒng)進(jìn)化分析
        2.2.5 超表達(dá)載體構(gòu)建
        2.2.6 柿果實(shí)瞬時(shí)遺傳轉(zhuǎn)化
        2.2.7 柿活體葉片瞬時(shí)遺傳轉(zhuǎn)化
        2.2.8 DkMYB15-GFP121 亞細(xì)胞定位載體構(gòu)建
        2.2.9 酵母單雜交
        2.2.10 酵母雙雜交
        2.2.11 雙分子熒光互補(bǔ)
3 結(jié)果與分析
    3.1 DkMYB15轉(zhuǎn)錄因子的序列分析
    3.2 DkMYB15在不同脫澀類型柿品種中的表達(dá)模式
    3.3 DkMYB15的亞細(xì)胞定位
    3.4 瞬時(shí)超表達(dá)DkMYB15對柿果實(shí)圓片相關(guān)基因表達(dá)的影響
    3.5 瞬時(shí)超表達(dá)DkMYB15對柿果實(shí)圓片單寧含量的影響
    3.6 DkMYB15與Dkb HLH2 互作驗(yàn)證
        3.6.1 Dkb HLH2 轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)模式及序列分析
        3.6.2 DkMYB15與Dkb HLH2 酵母雙雜交驗(yàn)證
        3.6.3 DkMYB15與Dkb HLH2 雙分子熒光互補(bǔ)驗(yàn)證
    3.7 共表達(dá)DkMYB15與Dkb HLH2 對柿葉片相關(guān)基因表達(dá)的影響
    3.8 共表達(dá)DkMYB15與Dkb HLH2 對柿葉片單寧含量的影響
    3.9 DkMYB15與Dk ANR的啟動子互作驗(yàn)證
4 討論
    4.1 DkMYB15抑制可溶性單寧的生物合成
    4.2 DkMYB15特異抑制單寧生物合成關(guān)鍵基因的表達(dá)
    4.3 DkMYB15與b HLH轉(zhuǎn)錄因子相互作用
5 進(jìn)一步研究設(shè)想
參考文獻(xiàn)
附錄
簡歷及在學(xué)期間科研實(shí)踐
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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