露地菊（Chrysanthemum morifolium）是菊科的多年生草本植物,也是重要的露地觀賞花卉。根據(jù)菊花開花的早晚即花期的不同,可以將其劃分為夏菊和秋冬菊。一般情況下夏菊的花期在夏季,但品種較單一,花型較小,觀賞性較差。大部分菊花屬于短日照植物,即在晚秋開花,這使得菊花的觀賞性受到了季節(jié)的限制,導(dǎo)致其商品價(jià)值降低。常規(guī)調(diào)控花期的方法,如控制溫度、光照時(shí)間等方法操作較為繁瑣,不易控制,大大地提高了生產(chǎn)花卉的成本。利用基因工程技術(shù)可以高效獲得具有目的性狀的植株,降低生產(chǎn)成本。研究表明植物的花發(fā)育受到很多因素的影響,其中光周期是尤為重要的因素,CONSTANS（CO）基因是擬南芥光周期遺傳調(diào)控途徑中的關(guān)鍵因子。本研究主要以露地菊品種‘火焰’為植物材料,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入具有控制植物開花時(shí)間功能的CO基因,利用甘露糖作為篩選介質(zhì)并結(jié)合PCR等分子鑒定方法,獲得陽性轉(zhuǎn)化植株,進(jìn)而調(diào)查陽性轉(zhuǎn)化植株的開花情況,從中篩選早花露地菊品系,旨在通過簡單易控的方法獲得不同花期的菊花新品種。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:1.植物表達(dá)載體的構(gòu)建:從擬南芥中擴(kuò)增獲得CO基因全長序列。利用Gateway技... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省211工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１擬南芥葉片總ｌｉＮＡ的電泳圖??２．４．２?基因全長的ＰＣＲ擴(kuò)增及序列測定??

?東北林業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文???Ｍ?１?２??２５〇ｂｐ?ｚｆｆ??ｌＯＯｂｐ?—？．－???圖２－２?ＰＣ?Ｒ反應(yīng)電泳檢測??Ｍ：分子量標(biāo)記Ｄ２０００；?１，２：?ＣＯ基因的ＰＣＲ條帶??將純化的ＰＣＲ產(chǎn)物連接到ｐＭＤ－Ｔ載體上，然后轉(zhuǎn)化到大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞ＪＭ１０９??中。在含有Ｘ－Ｇａｌ、ＩＰＴＧ、Ａｍｐ的培養(yǎng)基上過夜培養(yǎng)，隨即挑選］０個(gè)菌斑進(jìn)行搖菌，??提取質(zhì)粒，并進(jìn)行菌液ＰＣＩＩ鑒定。檢測結(jié)果如圖２－３可知，泳道１－５條帶較亮，泳道６－??１０條帶較弱，但都得到了所要的特異片段，選取送測序。??Ｍｌ?２３４５６?７８９?１０??．．．…ｉｌｌ？?■?．？：??：—?：??＝?＾??■■■■■■■■■■■■■■??克隆得到的目的基因序列序列與擬南芥ＣＯ基因（ＡＴ５Ｇ１５８４０）序列經(jīng)ｔｂｌａｓｔｘ比對??后相似性為１００％，表明己克隆得到擬南芥基因，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。??＞Ａ／Ｃ０３－５??ＧＣＴＣＣＣＡＣＡＣＣＡＴＣＡＡＡＣＴＴＡＣＴＡＣＡＴＣＴＧＡＧＴＴＡＴＴＡＴＧＴＴＧＡＡＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＡＡＣＧＡＣＡＴＡＧＧＴＡ??ＧＴＧＧＡＧＡＧＡＡＣＡＡＣＡＧＧＧＣＡＣＧＡＣＣＣＴＧＴＧＡＣＡＣＡＴＧＣＣＧＧＴＣＡＡＡＣＧＣＣＴＧＣＡＣＣＧＴＧＴＡＴＴＧＣＣＡ??ＴＧＣＡＧＡＴＴＣＴＧＣＣＴＡＣＴＴＧＴＧＣＡＴＧＡＧＣＴＧＴＧＡＴＧＣＴＣＡＡＧＴＴＣＡＣＴＣＴＧＣＣＡＡＴＣＧＣＧＴＴＧＣＴＴＣＣＣＧ??ＣＣＡＴＡＡＡＣＧＴＧＴＣＣＧＧＧＴＣＴＧＣＧＡＧＴＣＡＴＧＴＧＡＧＣＧＴＧＣＴＣＣＧＧＣＴＧＣＴＴＴＴＴＴＧＴＧＴＧＡＧＧＣＡＧＡＴＧ??ＡＴＧＣＣＴＣＴＣＴＡＴＧＣＡＣＡ

ＧＧＴ－３，??Ｃ?ｉｉＭＶ?３５Ｓ?ｐｒｏｉｎｏｒｅｒ－ｉ??ＩｎｃＺ?ｎｌｐｈｎ－ｉ?「〇ｓ?ｌｉｎｔ??３５Ｓ?ｐｒｏｍｏｔｅｒ＾?＼?Ｉ?ｉｎｔｒｏｎ??ｓｅｃｏｕｃ，?ｅｘｏｕ??＾?ｘ－ＮｏｓｐｏｌｖＡ??：ＵｔＢ＼２Ｗ＾?ｖＣ—Ｔ－Ｂｏｒｄｅｒ?（ｒｉｇｈｔ）??Ｃ?ａ＼Ｉ＼７?３５Ｓ?ｐｏｌｙＡ—ｙ?＾??Ｃｎ＼ｎ＾?３５Ｓ?ｐｒｏｍｏｒｅｉ—／ｊ，?＼??Ｊ?）??Ｃ＇ｎＭ＼＇?３５Ｓ?ｐｏｌｙＡ—／??Ｔ－Ｂｏｒｄｅｉ?（ｌｅｆｔ）－＾?Ｎｗ??圖３－丨丨漢’Ａ＞ｉｍＡ丨３ｍ－／Ｗ／－．ｉＵ（＇６＞載體結(jié)構(gòu)示意圖??３．２試驗(yàn)試劑??ＢＰ反應(yīng)試劑盒，ＬＲ反應(yīng)試劑盒，ＥｘＴａｑ．?Ａ７ｘ／Ｉ和（購買于Ｔｈｅｒｍｏ公司），??卡納（Ｋａｎａ），ＴＲＹＲＴＯＮＥ質(zhì)粒小提取試劑盒（ＴＩＡＮｐｒｅｐ?Ｍｉｎｉ?Ｐｌａｓｍｉｄ?Ｋｉｔ）購買于??Ｔｉａｎｇｅｎ公瓊脂糖，ＴＡＥ電泳緩沖液，溴化乙啶，溴酚藍(lán)，大腸桿｜；Ｔ尚株??（ＪＭ１０９）。??３．３試驗(yàn)方法??３．３．１利用ａｔｔＢ－ｚｌ／ＣＯ－Ｆｍ引物進(jìn)行目的基因ＰＣＲ??菌液處理：�。保ǎ幔�?Ｄ夜和９〇｜ｉＬ?ｄｄ?Ｈ＾Ｏ于ＥＰ?Ｉｆ中，１００變性５ｍｉｎ，然Ｉｎ冰丨．收??置２．５分鐘。??反應(yīng)體系：２０｜ｉＬ??－１５－??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3622970