由于番茄育種過(guò)程中櫻桃番茄優(yōu)良性狀的聚合及定向選擇,其遺傳背景越來(lái)越趨于狹窄,本研究首先利用Mi標(biāo)記,通過(guò)L16（45）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)櫻桃番茄實(shí)用化PCR分子標(biāo)記擴(kuò)增反應(yīng)體系進(jìn)行優(yōu)化;以收集到的54份櫻桃番茄種質(zhì)資源為供試材料,利用上述優(yōu)化后的PCR體系與程序?qū)┰嚨?4份櫻桃番茄進(jìn)行抗病性分子鑒定,并分別對(duì)表型性狀中的15個(gè)數(shù)量性狀進(jìn)行遺傳變異分析及相關(guān)性分析,對(duì)遺傳變異比較豐富的18個(gè)性狀進(jìn)行主成分分析,在此基礎(chǔ)上開展54份櫻桃番茄種質(zhì)的綜合評(píng)價(jià)和聚類分析;利用北京市農(nóng)林科學(xué)院申請(qǐng)專利中的第一套SSR引物（24對(duì)）,通過(guò)ABI 3500毛細(xì)管電泳儀對(duì)54份櫻桃番茄種質(zhì)資源進(jìn)行檢測(cè);利用374對(duì)SNP引物和KASP技術(shù)對(duì)54櫻桃番茄種質(zhì)資源進(jìn)行基因型檢測(cè);利用表型性狀結(jié)合SSR及SNP標(biāo)記對(duì)其進(jìn)行遺傳多樣性研究。研究結(jié)果表明:1.櫻桃番茄實(shí)用化PCR分子標(biāo)記PCR最佳反應(yīng)體系（20 μL）為引物0.5 μmol/L、Mg2+1.5mmol/L、dNTPs0.3mmol/L、DNA 480ng、聚合酶 1.OUTaq;最適退火溫度 56℃,最佳循環(huán)次數(shù)為33次;從中篩選出至少含有1種抗... 

【文章來(lái)源】：寧夏大學(xué)寧夏回族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：89 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１番茄葉片ＤＮＡ的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)??

Ｊ－２?０００?ｂｐ??關(guān)ｌ川隱：??圖２－１番茄葉片ＤＮＡ的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)??Ｆｉｇ．２－１?Ｔｈｅ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｏｇｒａｍ?ｏｆ?ＤＮＡ?ｓａｍｐｌｅｓ?ｏｆ?Ｔｏｍａｔｏ??２．２．２番茄抗病基因分子標(biāo)記ＰＣＲ正交設(shè)計(jì)直觀分析??正交試驗(yàn)ＰＣＲ產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖２－２所示，并對(duì)４次重復(fù)實(shí)驗(yàn)分別進(jìn)行評(píng)分（表２－５）。假設(shè)各因素??間不存在交互作用，計(jì)算同一影響因素不同水平打分結(jié)果的均值和極差，由表２－６可知，各因素對(duì)ＰＣＲ結(jié)??果的影響程度依次為：模板ＤＮＡ＞引物＞ｄＮＴＰｓ＞Ｍｇ＞＞Ｔａｑ酶，即模板ＤＮＡ對(duì)番茄ＰＣＲ反應(yīng)體系影響最大，??Ｔａｑ酶對(duì)番茄ＰＣＲ反應(yīng)體系影響最小。??１?１?２?２?３?３?４?４?５?５?６?６?７?７?８?８?９?９?１０?１０?１１?１１?１２?１２?Ｍ?１３?１３?１４?１４?１５?１５?１６?１６?Ｍ??■—２?０００?ｂｐ??Ｈ—１?０００?ｂｐ??Ｄ—７５０?ｂｐ??３—５００?ｂｐ??■?■?＾＾３—２５０?ｂｐ??ｉｏｏｂｐ??圖２－２抗病基因分子標(biāo)記反應(yīng)體系正交試驗(yàn)１６個(gè)處理的電泳結(jié)果??Ｆｉｇ．２－２?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｏｇｒａｍ?ｏｆ?Ｔｏｍａｔｏ?ｂｙ?ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｍａｋｅｒ?ｏｆ?ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ?ｇｅｎｅ?ｒｅａｃｔｉｏｎ?ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ?ｄｅｓｉｇｎ??？１２－??

抗病檢測(cè)任務(wù)重，為了更高效、便捷的同時(shí)鑒定多種病害，將退火溫度固定為５６°Ｃ。??２．２．６番茄抗病基因分子標(biāo)記ＰＣＲ循環(huán)次數(shù)的選擇??如圖２－５所示，為了保證ＰＣＲ擴(kuò)增效果更好，本實(shí)驗(yàn)對(duì)ＰＣＲ循環(huán)次數(shù)進(jìn)行篩選，分別設(shè)置了?３０次、??＇?３３次、３６次、３９次和４１次循環(huán)共５個(gè)循環(huán)梯度，結(jié)果表明，５個(gè)循環(huán)梯度均可擴(kuò)增出較為清晰的目標(biāo)條??帶，但３０次循環(huán)較其他循環(huán)次數(shù)來(lái)說(shuō)，擴(kuò)增出的條帶較弱，３３次、３６次循環(huán)擴(kuò)增出的條帶較亮，３９次、??４０次循環(huán)擴(kuò)增出的條帶最亮，在不影響試驗(yàn)結(jié)果的前提下從節(jié)約時(shí)間考慮，番茄抗病基因分子標(biāo)記ＰＣＲ??反應(yīng)循環(huán)次數(shù)為３３次即可保證正常擴(kuò)增。??３０?３０?３０?３３?３３?３３?３６?３６?３６?３９?３９?３９?４１?４１?４１?Ｍ??３－，?＇?－?？?■—２?０００?ｂｐ??１?０００?ｂｐ??■—７５０?ｂｐ??＜＇■＊?＊?八，５００?ｂｐ??２５０?ｂｐ??１００?ｂｐ??圖２－５循環(huán)次數(shù)對(duì)抗病基因分子標(biāo)記的影響??Ｆｉｇ．２－５?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｙｃｌｅ?ｔｉｍｅｓ?ｏｎ?ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ?ｇｅｎｅ?ｒｅａｃｔｉｏｎ?ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ?ｄｅｓｉｇｎ??２．２．７最佳反應(yīng)體系的驗(yàn)證與抗病種質(zhì)篩選??用篩選出的最佳反應(yīng)體系（２０?ＭＬ）：?０．５?Ｐｍｏｌ／Ｌ?引物、１．５ｍｍｏｌ／Ｌ?Ｍｇ２＿、０．３?ｍｍｏｌ／Ｌ?ｄＮＴＰｓ、１．０Ｕ?Ｔａｑ??ＤＮＡ聚合酶、４８０ｎｇＤＮＡ；最適擴(kuò)增程序：９５°Ｃ預(yù)變性５ｍｉｎｌ個(gè)循環(huán)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]關(guān)于我國(guó)農(nóng)業(yè)新舊動(dòng)能轉(zhuǎn)換的思考[J]. 樊祥成,徐曉梅.  農(nóng)村金融研究. 2018(05)
[2]氮磷鉀肥對(duì)木薯‘桂熱4號(hào)’生物量動(dòng)態(tài)的影響[J]. 鄭華,文峰,羅燕春,李軍,韋云東,盤歡.  熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(04)
[3]番茄種質(zhì)資源的多樣性和聚類分析[J]. 張靜,白瑞,賈瑩,溫仕達(dá),郎小平,許小勇.  中國(guó)瓜菜. 2018(02)
[4]基于表型性狀及抗病標(biāo)記的番茄種質(zhì)資源遺傳多樣性分析[J]. 張倩男,王曉敏,芮文婧,胡學(xué)義,胡新華,付金軍,高艷明,李建設(shè),張亞紅.  西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2018(01)
[5]應(yīng)用SNP標(biāo)記分析24份煙草品種的遺傳多樣性[J]. 張劍鋒,羅朝鵬,何聲寶,金靜靜,李澤鋒,許亞龍,謝小東,魏攀,王燃,楊軍.  煙草科技. 2017(11)
[6]山茴香SRAP反應(yīng)體系正交設(shè)計(jì)優(yōu)化及引物篩選[J]. 李維衛(wèi),王愛蘭,聶臻臻.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2017(08)
[7]47份大果番茄種質(zhì)資源表型性狀的遺傳多樣性[J]. 芮文婧,張倩男,王曉敏,胡新華,付金軍,高艷明,李建設(shè).  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(12)
[8]內(nèi)蒙古78份蔥屬野生種表型遺傳多樣性分析[J]. 李鴻雁,李俊,黃帆,李志勇,劉磊.  植物遺傳資源學(xué)報(bào). 2017(04)
[9]我國(guó)瓜菜產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀與發(fā)展方向[J]. 王娟娟.  中國(guó)蔬菜. 2017(06)
[10]酥瓜（Cucumis melo var. conomon Group）基因組DNA提取及RAPD分子標(biāo)記反應(yīng)體系的建立[J]. 陳國(guó)戶,葛繼濤,袁凌云,朱世東,蘇亞,劉姍,汪承剛.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2017(04)

博士論文
[1]簸箕柳基因組測(cè)序及功能基因研究[D]. 戴曉港.南京林業(yè)大學(xué) 2017
[2]基于SSR、SNP和形態(tài)學(xué)標(biāo)記的甘薯種質(zhì)資源遺傳多樣性研究[D]. 楊新筍.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[3]分子標(biāo)記技術(shù)在小麥抗白粉病育種及指紋圖譜分析中的應(yīng)用研究[D]. 王心宇.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2000

碩士論文
[1]普通粉果番茄和櫻桃番茄品種的綜合評(píng)價(jià)[D]. 趙娜.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2016
[2]蕓薹屬蔬菜低深度測(cè)序SNP分型及其應(yīng)用[D]. 付麗霞.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2016
[3]寧夏水稻地方品種與自育品種遺傳多樣性比較分析[D]. 馬斯霜.寧夏大學(xué) 2016
[4]基于表型性狀與SSR、SRAP標(biāo)記的苦瓜種質(zhì)資源遺傳多樣性分析[D]. 黃月琴.江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[5]加工番茄核心種質(zhì)構(gòu)建與重要農(nóng)藝性狀關(guān)聯(lián)分析[D]. 鄧學(xué)斌.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2015
[6]番茄種質(zhì)資源鑒定評(píng)價(jià)[D]. 張前榮.廣西大學(xué) 2014
[7]甘藍(lán)型油菜全基因組SCAR標(biāo)記開發(fā)及其應(yīng)用[D]. 肖娜蕓.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[8]茄子種質(zhì)資源形態(tài)學(xué)標(biāo)記及ISSR、SSR遺傳多樣性分析[D]. 于曉虎.西南大學(xué) 2012
[9]番茄抗病基因Ty-2的分子標(biāo)記及其在輔助選擇中的應(yīng)用[D]. 王琳珊.河北科技大學(xué) 2012
[10]基于SSR分子標(biāo)記的葡萄種質(zhì)資源遺傳多樣性分析及品種鑒定[D]. 張萌.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3589712