番木瓜環(huán)斑病毒（Papaya ringspot virus,PRS V）是番木瓜種植業(yè)毀滅性病害。定位于葉綠體的蛋氨酸亞砜還原酶B1（MsrB1）能還原被活性氧（Reactive oxygen species,ROS）氧化蛋白中的Met,以保護植物光合代謝。前期證明PRSV多功能蛋白NIa-Pro與番木瓜MsrB1（PaMsrB1）互作干擾了PaMsrB1定位于葉綠體,從而影響PaMsrB1進入葉綠體還原修復被ROS氧化的蛋白質,造成葉綠體不能進行正常光合代謝,這可能是新的一種病毒反防御機制。由于PaMsrB1為蛋白還原酶,PRSV-NIa-Pro的氨基酸序列含有4個Met,為了進一步探究PRSV-NIa-Pro和PaMsrB1互作的生物學意義,本研究證實了PaMsrB1可以還原被氧化的PRSV-NIa-Pro,為解析這種PRSV-NIa-Pro與PaMsr B1互作干擾PaMsrB1正常定位于葉綠體的病毒反防御新機制提供科學依據(jù)。同時,為進一步深入了解PaMsrB1在病毒與寄主互作中PaMsrB1對葉綠體抗氧化防護機制,本研究應用親和層析,納升級液相色譜串聯(lián)質譜聯(lián)用技術（Nano L... 

【文章來源】：海南大學海南省 211工程院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２：?ＰＲＳＶ－ＨＮ編碼的聚合蛋白巧巧位點??Ｆｉｇ．?２?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｇｅｎｏｍｉｃ?ｏｒｇａｎｉｚａ村ｏｎ?ｏｆ?ＰＲＳＶ－ＨＮ．??

ＰＲＳＶ－ＮＩａ－Ｐｒｏ基因與ｐＭＡＬｃ５ｘ載體經(jīng)１／公ａｗ／／?Ｉ雙酶切后連接，再轉化到??大腸桿菌感受態(tài)ＴｒａｎｓｌＯ，涂到含Ａｍｐ?ＬＢ固體培養(yǎng)基上，待平板長出菌落，挑取單??菌落，ＷＮＩａ－Ｆ、ＮＩａ－民為引物進行菌液ＰＣＲ鑒定，結果顯示（圖７）均為陽性菌落。??Ｍ?１?２?３?４?５?６?７８９??２，０００－??１?０００－??６００－??２５０－??＂０－??Ｍ；?ＤＬ?２，０００?Ｍａｒｋｅｒ；?１￣８：菌液?ＰＣＲ?結果；９；陽性對照。??Ｍ：ＤＬ?２，０００?Ｍａｒｋｅｒ；?１?？８：?Ｐｒｏｄｕｃ化?ｏｆ?ｂａｃｔｅｒｉａ?Ｌｉｑｕｉｄ?ＰＣ民；９：Ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ．??圖７：重組質粒ｐＭＡ＾ｃ５ｘ－ＮＰ的菌液ＰＣＲ鑒定??Ｆｉｇ?．７?：Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａ行ｏｎ?ｏｆ?ｐＭＡＬ－ｃ５ｘ－ＮＰ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐｌａｓｍｉｄｓ?ｂｙ?ｂａｃ化ｒｉａ?ｌｉｑｕｉｄ?ＰＣＲ??把陽性菌株加入穿刺管，送到生工生物工程（上海）有限公司進行測序，并提取??陽性菌質粒ｐＭＡＬｃ５ｘ－ＮＰ，對重組質粒進行Ｗｃｏｌ／公ｗｎ／／Ｉ雙酶切鑒定，鑒定結果（圖??８）和載體測序結果顯示：ＰＲＳＶ－ＮＩａ－Ｐｒｏ基因片段正確的插入ｐＭＡＬｃ５ｘ載體的閱讀??框架

０Ｍａｒｋｅｒ；?１：?ＮＩａ－Ｐｒｏ?擴增產(chǎn)物；２：?ｐＭＡＬｃ５ｘ－ＮＰ?ａｒｋｅｒ；ｌ：Ｔｈｅ?ＰＣ民?ｐｒｏ加ｃｔ?ｏｆＮＩａ－Ｐｒｏ；２：?ｐＭＡＪＬ－ｃ５ｘ－ＮＰ?ｄｉ圖８：重姐表達載體ｐＭＡＬ－ｃ５ｘ－ＮＰ的雙酶ｉｇ．８：Ｄｉｇｅｓｔｉｎｇ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｐＭＡＬ－ｃ５ｘ－］ＶＰ?ｖｅｃ化ｒ?ｗ化ｈ?ｉＶｐＭＡＬｃ５ｘ－ＮＰ轉化到原核表達菌株感受態(tài)ｒｒａ、ＮＩａ－Ｒ為引物進行菌液ＰＣ民檢現(xiàn)�。保Y果顯示：ｐｌＶＬＡＸ－ｄｘ－ＮＰ己成功轉入原核表達菌株７ｈ１２３４?５６７

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3579132