露地菊（Chrysanthemum morifolium）是菊科、菊屬的多年生宿根草本植物。露地菊是在地被菊基礎(chǔ)上獲得的具有優(yōu)良性狀的新品種。露地菊具有植株低矮,管理粗放,觀賞價(jià)值高,抗逆性強(qiáng)等特點(diǎn),是北方最常見的景觀植物。質(zhì)膜內(nèi)在蛋白（Plasma membrane intrinsic proteins,PIPs）作為水孔蛋白超家族MIP家族的一員,在植物抗逆過程中起到至關(guān)重要的作用。本試驗(yàn)從露地菊試驗(yàn)品種的抗逆性出發(fā),根據(jù)已有的關(guān)于PIPs水孔蛋白的相關(guān)抗逆性研究及其在轉(zhuǎn)基因植株抗逆過程中發(fā)揮的作用,利用相關(guān)生物信息學(xué)手段分析其他物種中已知的PIP基因序列,通過分子克隆技術(shù)獲得露地菊CmPIP基因序列,進(jìn)行相關(guān)的功能性研究,探尋CmPIP基因在植物抗逆過程中的表達(dá)模式。研究獲得轉(zhuǎn)基因露地菊再生植株,在一定程度上獲得抗逆性更強(qiáng)的植株,為進(jìn)一步研究露地菊抵抗脅迫環(huán)境,研究露地菊抗逆機(jī)理,改良露地菊抗逆特性,提高抗逆生長能力奠定基礎(chǔ)。本研究的主要結(jié)果如下:1.以東北林業(yè)大學(xué)花卉研究所培育的露地菊‘火焰’品系作為試驗(yàn)材料,利用cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)（RACE）克隆獲得露地菊CmPIP基因... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１露地菊‘火焰’??２．１．１．２試劑??

?２露地菊水孔蛋白ＣｍＰＩＰｓ基因的克隆及序列分析???計(jì)算距離的方法。??２．２．１結(jié)果與分析??２．２．１．１露地菊總ＲＮＡ的提取??利用ＴＲＩｚｏｒ法提取露地菊葉片總ＲＮＡ，瓊脂糖凝膠電泳檢測，紫外凝膠成像系統(tǒng)獲??得檢測照片（圖２－２）�？梢钥闯觯玻福蠛停保福髢蓷l明顯的核糖體ＲＮＡ條帶，亮度比約為２：１，??沒有明顯的降解。提取樣品濃度為１．０２１４＾§４＾，人２６０／２８０為１．９６。??圓???州??圓＾＊?Ｉ８Ｓ??…ｖ．：ｋ?＼??圖２－２露地菊葉片總ＲＮＡ??２．２．１．２露地菊ＣＷＶ尸基因克隆??以露地菊總ＲＮＡ反轉(zhuǎn)錄獲得的ｃＤＮ’ＡＡ模板，使用特異引物（表２－１）克隆獲得??保守區(qū)序列，得到２００?ｂｐ條帶（圖２－３）。測序獲得核酸序列信息（圖２－４）。以保??守區(qū)序列為模板，５’端使用基因特異性引物和錨定引物（Ａｎｃｈｏｒ）和接頭引物??（Ａｄａｐｔｏｒ），?３’端特異性引物以及Ｐ１８Ｅ和Ｐ１９Ｅ?（表２－４），進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增。瓊脂糖凝膠電泳??檢測擴(kuò)增產(chǎn)物。結(jié)果５’端獲得兩條片段，長度分別為６５０?ｂｐ和６００?ｂｐ?（圖２－５）；?３’端獲得??一條長為７００?ｂｐ的片段（圖２－５）。??Ｍ?１??丨丨｜丨｜丨＿ｆ丨丨叫??２０００ｂｐ?一??２５０ｂｐ?—??Ｍ：ＤＬ２０００Ｍａｋｅｒ；?１：?Ｃｏｔ尸／／Ｍ呆守區(qū)??圖２－３?Ｃｗ／ＶＰ保守區(qū)電泳圖??－１７－??

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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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