高羊茅（Festuca arundinacea）原產(chǎn)西歐、北非,是溫帶地區(qū)廣泛應(yīng)用的草坪草和牧草。因其具有抗逆性強、耐踐踏、耐粗放管理、綠期長、建坪快等特點,故被廣泛應(yīng)用于城市綠化、水土保持等方面。常見的暖季型草坪草和冷季型草坪草都有季節(jié)性“休眠”,人們在草坪草種選擇時更傾向于綠期長的草種。冷季型草坪草在夏季的“休眠”現(xiàn)象是生產(chǎn)利用中的主要限制因素,延長綠色期是高羊茅草種選育的主要目標之一。本研究克隆高羊茅內(nèi)源滯綠基因FaSGR基因片段,構(gòu)建RNAi-FaSGR基因沉默載體系統(tǒng),研究了農(nóng)桿菌介導(dǎo)技術(shù)將該載體轉(zhuǎn)入高羊茅體內(nèi)表達,旨在獲得綠期延長的高羊茅植株,為RNAi沉默技術(shù)編輯在草坪草遺傳改良上的運用奠定實驗基礎(chǔ)。具體研究方法和主要結(jié)論如下：（1）高羊茅離體葉片黑暗處理6d時脯氨酸含量、丙二醛含量最高；相對葉綠素含量隨著黑暗處理時間的延長而逐漸減少；葉片枯黃面積比例則反之。最終確定黑暗處理6d的高羊茅離體葉片作為提取RNA的材料,成功克隆到高羊茅FaSGR基因片段（1346 bp）。（2）高羊茅FaSGR基因片段的生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),該基因片段與GenBank SGR參考序列（GenB... 

【文章來源】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 高羊茅應(yīng)用的研究進展
        1.1.1 高羊茅應(yīng)用上的優(yōu)勢
        1.1.2 高羊茅研究進展
        1.1.3 高羊茅在生產(chǎn)應(yīng)用存在的問題
    1.2 RNAi基因沉默研究進展
    1.3 滯綠基因研究進展
        1.3.1 滯綠突變體的發(fā)現(xiàn)及滯綠基因SGR的克隆
        1.3.2 SGR蛋白保守性
        1.3.3 滯綠基因SGR參與的葉綠素代謝途徑
    1.4 論文研究目的與意義
第2章 實驗材料與方法
    2.0 實驗材料
    2.1 主要試劑和儀器
    2.2 培養(yǎng)基及菌株等
    2.3 生理生化實驗測定指標方法
    2.4 高羊茅FaSGR基因的克隆
        2.4.1 引物設(shè)計
        2.4.2 高羊茅FaSGR基因的克隆和測序
        2.4.3 高羊茅FaSGR基因序列的分析
    2.5 高羊茅FaSGR基因沉默載體的構(gòu)建
        2.5.1 引物設(shè)計
        2.5.2 目的片段的克隆和測序
        2.5.3 入門載體的構(gòu)建
        2.5.4 pANDA-SGR載體構(gòu)建
    2.6 高羊茅FaSGR-RNAi轉(zhuǎn)基因體系的構(gòu)建
        2.6.1 農(nóng)桿菌細胞活化
        2.6.2 農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞的制備
        2.6.3 RNAi-FaSGR表達載體轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞
        2.6.4 根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化條件的影響因素
    2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理方法
第3章 結(jié)果與分析
    3.1 高羊茅FaSGR基因的克隆與分析
        3.1.1 高羊茅離體葉片黑暗處理實驗
        3.1.2 高羊茅FaSGR基因獲得與驗證
    3.2 高羊茅FaSGR基因序列生物信息學(xué)分析
    3.3 高羊茅FaSGR基因沉默載體構(gòu)建
        3.3.1 目的基因片段的獲得
        3.3.2 入門載體陽性克隆檢測
        3.3.3 表達載體的陽性克隆檢測
    3.4 高羊茅FaSGR-RNAi轉(zhuǎn)基因體系的構(gòu)建
        3.4.1 平板培養(yǎng)基抗生素的濃度對農(nóng)桿菌生長的影響
        3.4.2 轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌及其驗證
        3.4.3 預(yù)培養(yǎng)培養(yǎng)基抗生素濃度的影響
        3.4.4 抗性愈傷組織的篩選
第4章 全文討論
    4.1 高羊茅離體葉片的黑暗處理
    4.2 高羊茅FaSGR基因生物信息學(xué)分析
        4.2.1 生物信息學(xué)
        4.2.2 植物SGR基因生物學(xué)信息
    4.3 高羊茅FaSGR基因RNAi表達載體的構(gòu)建
        4.3.1 RNAi載體構(gòu)建方式
        4.3.2 植物RNAi載體系列
        4.3.3 構(gòu)建SGR基因載體的啟動子
    4.4 高羊茅FaSGR-RNAi轉(zhuǎn)基因體系的構(gòu)建
第5章 總結(jié)
    5.1 本研究主要結(jié)論
    5.2 本研究特色與創(chuàng)新之處
    5.3 后續(xù)研究工作展望
參考文獻
附錄
致謝
作者簡介



本文編號：3521558